2楼: Originally posted by yixuanwin at 2012-07-24 14:22:51
1  使用高纯度的dNTP
2   做梯度试试
3  最后一步延伸时间增加到20min以上。
4  体系选择50 微，稳定性比20微好很多。

3楼: Originally posted by love_st at 2012-07-24 16:34:24
不如重新设计引物

5楼: Originally posted by litingwen at 2012-07-24 22:27:55
做梯度PCR试验，延伸温度72° 5min试试

7楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-25 11:13:43
我以前扩12kb以上的片段也费了比较大的劲，而且用的都是质粒为模板，前两天我们一个老师用我的质粒为模板，用他自己生产的聚合酶，很轻松的扩增出了18kb，而且只用了20循环，延伸6min。建议使用

12楼: Originally posted by yuqin1987 at 2012-07-26 15:39:09
问题是我可以扩的出来，就是浓度不够后续实验啊？...

11楼: Originally posted by yuqin1987 at 2012-07-26 15:38:34
dDNP本来就是公司附带的高纯度的
梯度PCR也试过了
都不行。
延伸时间要延长那么多啊？？？
体系也一直都是50ul的...

14楼: Originally posted by yuqin1987 at 2012-07-26 15:43:47
他自己生产的聚合酶是什么酶啊？
我现在就怀疑是酶的问题...

6楼: Originally posted by stone2239 at 2012-07-25 06:24:33
我认为可从以下几点改进：
1.加大dNTP量，可加倍
2.72℃延伸6min或7min
3.最后一步延伸10min以上
4.用50微升体系，楼上也说了，一旦扩出来，一管就够后面的实验了
5.还不行的话重新设计引物
我前几天才扩了一 ...