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yuqin1987

新虫 (初入文坛)

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虫号: 820495
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专业: 环境生物物理

[求助] 5kb大片段PCR扩增求助

我用细菌DNA为模版扩增一5kb片段，用的TAKARA的PrimeSTAR HS DNA Polymerase，反应条件98℃ 5min，98℃ 45s（变性），56℃ 20s（退火），68℃ 5min（延伸），68℃ 8min。扩出来的条带很暗，浓度很低，无法用于后续实验，求助各位高手，多多指教！

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1楼2012-07-23 09:56:38

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南海所老龚

新虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
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在线: 124.1小时
虫号: 1247324
注册: 2011-03-28
专业: 基因组学

引用回帖:

6楼: Originally posted by stone2239 at 2012-07-25 06:24:33
我认为可从以下几点改进：
1.加大dNTP量，可加倍
2.72℃延伸6min或7min
3.最后一步延伸10min以上
4.用50微升体系，楼上也说了，一旦扩出来，一管就够后面的实验了
5.还不行的话重新设计引物
我前几天才扩了一 ...

8K，楼主都是扩大片段的么，用的是什么酶啊？