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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 转膜后只看到marker条带，看不到样本，是怎么回事？
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)

[求助] western blot 转膜后只看到marker条带，看不到样本，是怎么回事？

电泳在浓缩胶用80v跑了40分钟，蓝色的线到浓缩胶和分离胶交界处时转成120v，再跑1小时，蓝线到分离胶底部时结束。转膜用的是pvdf膜，用甲醇浸泡5秒，后放在转膜缓冲液中，转膜顺序正确，挤出气泡，转膜2个小时后，能看到marker条带清晰在膜上，但就是看不到蛋白，不知什么原因
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1楼 2012-07-21 10:47:17
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zhuzhuba1

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ytxy at 2012-07-21 12:32:39
marker 是预染的，有颜色的，当然能看见了。蛋白要最后通过发光物才能间接指示。你也可以把膜或胶用丽春红或考马斯亮蓝染一下，可以看出蛋白条带。

我用丽春红染了，还是看不到，会不会是电泳时间太久了
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3楼2012-07-22 09:10:55
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ytxy

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-07-21 15:56:22
zhuzhuba1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-23 14:55:53
marker 是预染的，有颜色的，当然能看见了。蛋白要最后通过发光物才能间接指示。你也可以把膜或胶用丽春红或考马斯亮蓝染一下，可以看出蛋白条带。
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2楼2012-07-21 12:32:39
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废哥117

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhuzhuba1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-23 14:56:08
甲醇一般激活30秒到一分钟，激活不充分的话，可能会转不上去，还有你的转膜条件是什么？是恒压还是恒流？
再一个就是你的上样量多少？蛋白浓度高或者低？丽春红的敏感度并不是很好，你可以在里面多染一会，或者你的丽春红已经失效
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不断提高自己
4楼2012-07-22 11:26:22
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先膜上有marker就说明转膜没有问题，2楼正解，marker 是预染的肯定能看见喽，关键是你染色的一步，现在常用化学发光，其他的没有接触过。
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实验顺利！！
5楼2012-07-23 14:12:40
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