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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 5L反应器发酵接种前一小时，pH飙升了0.6。。。。。。
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铁人小强

木虫 (小有名气)

[交流] 5L反应器发酵接种前一小时，pH飙升了0.6。。。。。。

RT，pH短时间内上升了0.6，接种后，通过流加1M 盐酸逐渐降低pH，待pH降至正常水平时，停止pH的调节，pH恢复自然变化。随后过程中，pH缓慢下降（以葡萄糖为碳源），但DO基本保持不变，取样时发现，发酵液浑浊，我发酵培养的是丝状真菌，镜检发酵液确实存在其他微小的杆状微生物，但搞不懂的是，若是染菌，为什么DO不降呢，难不成是非耗氧菌，有氧环境也不会抑制其生长。

请问作发酵的同行们，有见过类似情况的没？帮忙分析一下吧
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1楼 2012-07-19 22:43:37
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回帖置顶 ( 共有17个 )

cnlah

木虫 (职业作家)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
pH变化可能是灭菌前后的变化，高温会影响里面的成分。如果丝状真菌中有杆菌，100%染菌，但是要排除一些培养基中的杆状纤维颗粒。染菌一定是好氧菌，因为厌氧菌生长缓慢，无法和好氧菌包括真菌在好氧竞争。DO不变说明菌体呼吸强度变化不大。要么也可能DO坏了，这个仪器太精贵了。葡萄糖为碳源一定是会降pH的，有有机酸生成。但是一般丝状真菌可以适应酸性环境。问题不大。总结你染菌了，pH没有问题。
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3楼2012-07-20 07:01:39
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chenweilala

金虫 (小有名气)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
罐子染的杆菌一般来说为大肠杆菌（兼性好氧菌）；至于发酵液已变浑浊，而DO值却并未下降，此原因可能是杆菌还未开始大规模繁殖生长，先前培养基中的过多的饱和氧满足它的生长需氧量。
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5楼2012-07-20 08:00:27
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
可以是染兼性厌氧菌，开始时菌密度不会太大，DO不一定能看出来。
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6楼2012-07-20 08:03:24
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xujb32

银虫 (知名作家)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与

你把培养液涂平板看看吧，我见到过真菌变性的。
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7楼2012-07-20 08:34:12
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cnlah at 2012-07-20 07:01:39
pH变化可能是灭菌前后的变化，高温会影响里面的成分。如果丝状真菌中有杆菌，100%染菌，但是要排除一些培养基中的杆状纤维颗粒。染菌一定是好氧菌，因为厌氧菌生长缓慢，无法和好氧菌包括真菌在好氧竞争。DO不变说明 ...

灭菌后接种前的时间长达10个小时，有维持恒定条件，pH只是在接种前1小时上升，所以不可能是是灭菌前后的变化，而且变化也不会有这么大的幅度。培养基比较简单，没有任何纤维颗粒。要是耗氧菌，DO不可能不降。
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13楼2012-07-20 09:54:08
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenweilala at 2012-07-20 08:00:27
罐子染的杆菌一般来说为大肠杆菌（兼性好氧菌）；至于发酵液已变浑浊，而DO值却并未下降，此原因可能是杆菌还未开始大规模繁殖生长，先前培养基中的过多的饱和氧满足它的生长需氧量。

那接种前为什么pH会上升呢？
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14楼2012-07-20 09:55:04
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xujb32 at 2012-07-20 08:34:12

你把培养液涂平板看看吧，我见到过真菌变性的。

我曾经遇到过类似情况，涂板后确实有乳白色杂菌生长
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15楼2012-07-20 09:56:03
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chenweilala

金虫 (小有名气)
我现在也是在做5L发酵罐，巧合的是和楼主一样染菌了，而且是杆菌！我每次灭完菌后，接种前，会发现随着温度的降低，空气的通入，pH会有小幅上升的趋势，这个很正常。后来，我又在100L发酵罐上进行试验，得到同样的效果！！
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16楼2012-07-20 12:14:29
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by chenweilala at 2012-07-20 12:14:29
我现在也是在做5L发酵罐，巧合的是和楼主一样染菌了，而且是杆菌！我每次灭完菌后，接种前，会发现随着温度的降低，空气的通入，pH会有小幅上升的趋势，这个很正常。后来，我又在100L发酵罐上进行试验，得到同样的效 ...

我的罐不是每次都会pH上升的，温度和空气通入，一般不会影响pH和DO，因为我的通气和温度都是恒定的
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17楼2012-07-20 12:38:07
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choly

木虫 (著名写手)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
以后我估计也会做发酵。。所以多看看。。
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18楼2012-07-22 12:00:58
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h0per

金虫 (小有名气)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
染大肠的情况不可能，基本上是染芽孢杆菌和球菌。
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19楼2012-07-22 21:00:20
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by h0per at 2012-07-22 21:00:20
染大肠的情况不可能，基本上是染芽孢杆菌和球菌。

为什么猜测是芽孢杆菌啊？
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22楼2012-07-24 07:58:12
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feiandqiang

银虫 (小有名气)
校正是有区别的，好的校正没问题，校正不好很容易出现你这种情况
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24楼2012-07-24 08:52:14
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h0per

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 铁人小强 at 2012-07-24 07:58:12
为什么猜测是芽孢杆菌啊？...

大规模生产的时候，基本上是染芽孢杆菌和球菌。不是猜测，是肯定。
多是通过空气系统或培养基灭菌不彻底导致的。请参照微生物在空气水土壤中的分布去考虑这个问题。 你华理的？校友？
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26楼2012-07-24 14:53:29
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by h0per at 2012-07-24 14:53:29
大规模生产的时候，基本上是染芽孢杆菌和球菌。不是猜测，是肯定。
多是通过空气系统或培养基灭菌不彻底导致的。请参照微生物在空气水土壤中的分布去考虑这个问题。 你华理的？校友？...

恩，华理的，一般染菌后，初期都是DO下降,pH也下降，所以对这种pH上升，DO不降的情形还真很少见
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27楼2012-07-24 23:05:52
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419400

铁杆木虫 (正式写手)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
感觉与电极漂移有关，这样的问题我见过许多，一般与电极有关。因为我见到过这样的问题，发酵都成功。这只是我个人意见。
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28楼2012-07-27 11:51:19
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liurechen

银虫 (小有名气)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
我也做丝状真菌发酵的，由于控制pH比较低所以比较少染细菌，如果染的话一般是杆菌（细长的比较多），同时pH上升。因为发酵过程正常情况下pH是逐渐下降的，所以只要上升了基本可以肯定染菌了。
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29楼2012-07-27 15:01:02
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
路过
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10楼2012-07-20 08:57:10
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feiandqiang

银虫 (小有名气)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
你校正了吗
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20楼2012-07-23 09:22:46
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铁人小强

木虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by feiandqiang at 2012-07-23 09:22:46
你校正了吗

电极校正是常识吧
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23楼2012-07-24 07:58:36
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ddan

金虫 (小有名气)
★
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
多了解一下
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25楼2012-07-24 11:10:55
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sush20122楼
2012-07-19 23:16   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
shihao6114楼
2012-07-20 07:46   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
zhengkning8楼
2012-07-20 08:38   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
郑克宁9楼
2012-07-20 08:45   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
longway10211楼
2012-07-20 09:00   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
brooksh12楼
2012-07-20 09:07   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
strive12312321楼
2012-07-23 10:13   回复  
铁人小强(金币+1): 谢谢参与
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