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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[交流] 表达NCBI里面预测的基因。有经验的战友帮助一下。

我想克隆一个预测的基因，NCBI里面有预测的序列，序列前面有PREDICTED字样，哪位朋友有这方面的经验吗。我能不能直接用这个预测的序列设计引物来扩增出他，或者我换成另一个生物的，也来克隆这个基因，能不能用这个预测的基因来设计引物。或者还是走传统的设计兼并引物，这样比较复杂啊，还不出结果。偶是新手，希望不吝赐教。
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1楼 2012-07-14 16:11:17
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tupac225

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:27
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:35
认为你应该先找到保守序列，看在上游还是下游，根据情况先确定一个引物，然后可以考虑一下扩增未知片段的一些方法，比先设计随机引物（用它作为下游引物）做个热不对称交错PCR（TAIL-PCR），然后再用RACE扩增两翼的片段。对于鉴定，应该需要做蛋白质序列分析与基因编码氨基酸的序列的比对吧
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2楼2012-07-14 19:09:34
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-14 19:09:34
认为你应该先找到保守序列，看在上游还是下游，根据情况先确定一个引物，然后可以考虑一下扩增未知片段的一些方法，比先设计随机引物（用它作为下游引物）做个热不对称交错PCR（TAIL-PCR），然后再用RACE扩增两翼的 ...

我把几种动物的这个基因，有确定的（哺乳动物的），也有预测的（鱼类的），放在一起比对了一下，发现高度保守区在中间，两端还行，但不是特别保守。我是要扩增一种鱼的该基因，我需要设计几个简并引物？本人新手，你的只言片语对我是莫大的而帮助。谢谢。
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3楼2012-07-15 11:20:07
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