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fengyunqb

新虫 (小有名气)


[交流] 表达NCBI里面预测的基因。有经验的战友帮助一下。

我想克隆一个预测的基因,NCBI里面有预测的序列,序列前面有PREDICTED字样,哪位朋友有这方面的经验吗。我能不能直接用这个预测的序列设计引物来扩增出他,或者我换成另一个生物的,也来克隆这个基因,能不能用这个预测的基因来设计引物。或者还是走传统的设计兼并引物,这样比较复杂啊,还不出结果。偶是新手,希望不吝赐教。
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tupac225

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:27
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:35
认为你应该先找到保守序列,看在上游还是下游,根据情况先确定一个引物,然后可以考虑一下扩增未知片段的一些方法,比先设计随机引物(用它作为下游引物)做个热不对称交错PCR(TAIL-PCR),然后再用RACE扩增两翼的片段。对于鉴定,应该需要做蛋白质序列分析与基因编码氨基酸的序列的比对吧
2楼2012-07-14 19:09:34
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fengyunqb

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-14 19:09:34
认为你应该先找到保守序列,看在上游还是下游,根据情况先确定一个引物,然后可以考虑一下扩增未知片段的一些方法,比先设计随机引物(用它作为下游引物)做个热不对称交错PCR(TAIL-PCR),然后再用RACE扩增两翼的 ...

我把几种动物的这个基因,有确定的(哺乳动物的),也有预测的(鱼类的),放在一起比对了一下,发现高度保守区在中间,两端还行,但不是特别保守。我是要扩增一种鱼的该基因,我需要设计几个简并引物?本人新手,你的只言片语对我是莫大的而帮助。谢谢。
3楼2012-07-15 11:20:07
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