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的PCR一直没有P出来，不知道哪里出了问题，请各位帮忙指点一下，谢谢！！1
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最近一段时间在做PCR,但一直都没有P出来，刚开始的时候怀疑是不是模板有问题，就用别人的试剂，引物也是别人的，结果有P出来，说明DNA没有问题，试剂有可能有问题，就在我尝试想看看是哪个试剂出现问题的时候，结果发现试剂没有问题，都P出来了，我是这么做的： 第1管：别人的10*Buffer,我的dNTP,我的引物，我的酶； 第2管：我的10*Buffer，别人的dNTP，我的引物，我的酶； 第3管：我的10*Buffer，我的dNTP，别人的引物，我的酶； 第4管：我的10*Buffer，我的dNTP，我的引物，别人的酶，就是这样错开一个，DNA 都是和上面同一个，结果都P出来了，如果是这样的话，试剂应该没有问题啊。 第二天我又继续这样做，全部都用我的试剂，我的引物，我的DNA，结果又没有P出来，重复了很多次，我怕我操作有问题，配体系的时候，一起加最后分装和一个一个加体系我都做了好几遍，每次PCR管内的液体都混匀了，重复了N多次，都没有P出来，很郁闷。 因为时间很紧，又继续做，重复了很多次之后，终于有一次有P出来，正当我高兴开始做割胶回收配PCR体系时，它又没有P出来，我叫我实验室的给我配体系，同样也还是没有P出来，重复了很多次，依然没有P出来，我怀疑是引物的问题，今天就用别人的引物，其他的试剂都是我的，结果一次性就P出来了，而用我自己的引物P了很多次，都没有P出来，我真的不知道是哪里出了问题，请各位高人指点一下。如果是引物的问题，那我中间有一次怎么又会P出来呢 |
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5楼2012-07-13 12:15:00
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