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还是凝胶柱的问题
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本人菜鸟一个，实验室又没师兄师姐，老师又不教我，现在凝胶已经跑完一次了，该合的也都合了，之后就不知道怎么办了，有两个问题，1、是不是合完之后例如15-25瓶的东西直接再跑凝胶，跑完之后再合，然后再跑？2、我发现开全速上样和10s/d上样原始谱带的宽度不一样，开全速原始谱带能有3cm的样子，而慢慢的流的话原始谱带只有1cm，是不是上样时下面流慢一点好啊？ 谢谢大家 |
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zgzykxyygp
铜虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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做分离不是随便拿一根柱子就来搞，需要选择合适的方法，思路一定要清楚，我刚开始什么也不会，撞柱子都不会，也没人教，全都是自己跑到其他实验室看人家怎么做，回来再研究。不过我比较幸运，从什么都不会到不到五个月的时间，共分离了29个化合物，都是萜类化合物，现在已经分完了，努力解谱中，好像新的还不少。 说这些，只是想说明，1 植化分离比较简单，用心去做，很容易上手。2.植化时不要乱做，方法要对，要仔细，不然就那么几mg，很难得到的新化合物，我做时很仔细，个人觉得过程中损失的很少。这个一定注意，切记乱上柱子，不细心。 对于你说的选什么柱子： 1.2楼说得对，一次上凝胶了，若不是自己失误造成的，若分离效果不好，就不要再上了（一般黄铜分离好，像我的倍半萜就不行，几乎分不开，因为同分异构太多了，我分到了一个平面结构的5-6个立体异构），至于流速，根据原理来理解，当然慢一点好（是靠分子大小fenli)柱子细长一些较好，一般至少长60-70cm，我看他们有用2m多长的，驾着凳子加液，具体根据自己的分离对象而定 2.除了凝胶，点个正向和反向薄层看一下，那个效果好，就确定用哪个，不要不对比的反复乱搞，再就是装住上扬一定要仔细，这个本来很简单的事，搞得不好直接影响分离效果，结果别人能分开，你就分不开。 3.对别人的经验，切记乱套。因为每个人的分的植物确切的说分离的类型可能不一样，所以得出的经验不一样，但是，分离都是大同小异。总之，不盲目采取，但不得不多听听人家的经验。自己再根据实际情况去摸索，去思考，自己拿主意。 解了一天的谱了，思绪有些乱，想到哪，说到哪，没什么逻辑，但希望对你有帮助。 |
7楼2012-07-09 20:31:10
tianzeng21c
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-07-05 23:30:52
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-07-05 23:30:52
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1 楼主可先要搞明白凝胶柱的分离原理。 2 如果一个样品跑完一次凝胶后，若发现有分离效果，可以继续把该合的样品合并后再次上凝胶柱进行色谱；如果发现没有什么分离效果，那就不要再上了吧，可能凝胶柱的分离原理不适合你的样品。就考虑别的分离机理的填料。 3 凝胶柱色谱时，刚开始上样时，下面务必要慢慢地流，待你要分离的样品明显有分开的效果，如果带有颜色的话可看到，这时可适当提高柱子流速，毕竟，柱子流得太慢太耗时间了。 4 我们利用凝胶柱时，一般情况下，五六个小时让样品通过凝胶柱，这已经比较慢了，中间不要停，最慢当天也要跑完。 |
2楼2012-07-05 22:39:40
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3楼2012-07-09 15:00:59
lhg0209asd
银虫 (正式写手)
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4楼2012-07-09 15:36:18
