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dy_414

木虫 (正式写手)

[求助] 盐酸胍复性的问题

首先祝大家实验顺利!

最近在做盐酸胍变性蛋白的复性工作(之前是尿素作为变性剂,但是新蛋白尿素不能溶解,盐酸胍可以),发现大多数蛋白全部沉淀了。试过盐酸胍梯度和TGE复性液(之前别的蛋白的复性都非常好),用过8.1, 7.4, 6.2, 5.2四个浓度的缓冲液,结果只是TGE+pH6.2时有大约4%的回收率。请问大家,有没有遇到过类似问题,或者有没有好的方法?

谢谢!
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我坚信,rp是攒出来的
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shoppinggirl

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

大多数蛋白沉淀无所谓的,要看你缓冲液的pH,你目的蛋白的pI是多少呢,相差1-2个等电点比较保险。
4楼2012-07-17 18:21:52
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dy_414

木虫 (正式写手)

自己再顶一下哈!
我坚信,rp是攒出来的
3楼2012-07-17 13:39:57
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dy_414

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shoppinggirl at 2012-07-17 18:21:52
大多数蛋白沉淀无所谓的,要看你缓冲液的pH,你目的蛋白的pI是多少呢,相差1-2个等电点比较保险。

我蛋白的PI预测是在8.9,我分别试过8.1, 7.4, 6.2和5.2,结果都是一样的
我坚信,rp是攒出来的
5楼2012-07-18 09:39:34
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