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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 虫友们，有没有做易错PCR的，有没有专门的低保真Taq酶
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awenrou

木虫 (小有名气)

[求助] 虫友们，有没有做易错PCR的，有没有专门的低保真Taq酶

如题，虫友们，有没有做易错PCR的，是不是有专门的低保真Taq酶？
谢谢大家！如果有易错PCR的经验，也希望分享一下~~谢谢！！

[ Last edited by awenrou on 2012-6-28 at 16:46 ]
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1楼 2012-06-28 16:43:18
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
awenrou: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-06-29 11:31:13
就普通PCR酶就可以，退火温度稍微低点。很易错的
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3楼2012-06-28 20:01:57
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
awenrou: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢! 2012-06-29 11:30:54
我印象中镁离子很重要，调节镁离子的浓度就能实现保真度的调节。易错的话好像是只要增加镁离子浓度就可以了。
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2楼2012-06-28 19:08:35
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jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 371522029 at 2012-06-28 19:08:35
我印象中镁离子很重要，调节镁离子的浓度就能实现保真度的调节。易错的话好像是只要增加镁离子浓度就可以了。

2楼正解
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4楼2012-06-28 23:49:31
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easonyshen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
awenrou: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-06-29 11:31:30
酶的话用普通的taq就可以了
在反应条件上来说，提高镁离子的浓度，并适当加入锰离子，可以提高错配率。
用非平均的dNTP： 0.2 mM  dGTP 、dATP ， 1.0 mM dCTP， dTTP.
另外，减少模版DNA的量也可以(大约10ng）。
赞一下 回复此楼
蛋白质工程师：荧光蛋白开发
5楼2012-06-29 02:40:40
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