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tianyahuimou金虫 (正式写手)
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岛津HPLC出现倒峰是什么原因
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如题，最近用岛津HPLC做手性拆分，用的是紫外检测。发现出现一个正峰之后，出现一个倒峰，然后又出现一个正峰。开始我以为是柱子的问题。但是后来我又换了一根柱子。结果也是跟第一个柱子一样。 两根柱子是键合的大赛璐的IC、ID柱子，对溶剂的耐受性很好，柱子的压力也稳定。 网上看了下类似问题，以为是溶剂问题。我的流动相是石油醚和异丙醇，而样品是用二氯甲烷溶解的。但是DCM和流动相是互溶的，应该不存在溶剂对峰型的影响，因为以前也这样做过，拆分没出现过问题。 是什么原因？急…… 希望各位HPLC高手能指点一二。 |
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【答案】应助回帖
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soundhorizo: 金币+2, ACI+1, 感谢应助 欢迎常来分析版交流指导^^ 2012-07-21 21:50:45
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出现倒峰的原因： 1.常为溶剂峰,流动相的紫外吸收大于样品的溶剂的紫外吸收,就产生倒峰. 2.样品中的杂质没有紫处吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在220nm以下时,常出现这种现象. 3.进样过程中进入了空气也会导致的. 4.如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂作为流动相。 5.检测器的极性接反了，也会出现倒峰。 第一，用的是什么检测器？如果是示差折光，那很正常； 第二，倒峰在什么位置？如果是溶剂峰，也很正常，要去除的话，溶剂改用流动相； 第三，如果是紫外检测器（MWD,OR DAD）,有没有加参比波长？如果有，去掉参比波长或另选合适的参比波长； 第四，如果是紫外检测器，流量池里是否有气泡产生？1.抽滤或超声去除流动相里的气泡；2.检查在线脱气机（如果有的话）；3.调节背压； 第五，流动相是否在该波长（用紫外检测器的话）有较大的背景？1.检查你用的溶剂的等级；2.检查色谱条件的合理性。 我认为是参比波长设置的问题，试着换个参比波长看看 多半是因为样品的ＰＨ值与流动相的ＰＨ值不一致造成的，解决办法：加大盐的浓度，用流动相溶解样品即可． 流动相背景吸收波长低于检测波长 1. 组分的吸收小于流动相的背景吸收，可能原因是流动相中加入截止波长较大的成分或波长选择不合适 2.二极管阵列检测器中参比波长处吸收大于组分吸收； １、 首先确定是还是柱还是检测器的问题：换下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再换检测器，以确定是否检测器或者柱的问题。或者什么都不要换单纯换个其他化学成分，看是否是因为你的样品存在问题。 2、如果都做了，还是不行，就考虑是否流动相问题，一般DAD存在有规律倒峰的现象还真的不是很好解释，看您意思好象是倒峰只是跟着你的主成分走，这样你可以首先进个空白溶剂样品，看是否还有倒峰存在，如果空白样品没有倒峰那么就是你样品问题，是否你样品处理的有问题， 一般液相对流动相的PH控制在大概2.5-7.5范围，如果过酸或过碱会导致填料被破坏引起成分在柱上的洗拖保留发生变化而导致规律倒峰出现也有可能，测下您的流动相PH以保证这个没问题。样品中残留的一点酸或碱应该没问题，因为酸碱在柱上基本没有保留，且量小应该没影响 倒峰的出现，我个人认为是色谱柱的残余硅羟基所致，同一个色谱条件，我曾经分别用非端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是进流动相也会出现负峰，后者则没有，推断应为残余硅羟基对进样样品中的部分离子造成吸附，使进样部分的液体与流动相产生差异，由于溶质离子经过检测器时，紫外吸收信号减小，所以形成负方向的色谱峰。 1.样品引入 2.样品与流动相反应所致 3.检测条件不合适,建议换二极管阵列查找 4.外部引入的污染 最后一点几率很小,但也会存在的,就是仪器设备的系统误差 |
6楼2012-06-18 16:27:19
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