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xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 用Hoechst33342/PI 双染做流式,居然只检测到坏死细胞,这是个什么状况

今天做了流式,是用凯基的Hoechst33342/PI 双染试剂盒来检测细胞凋亡,但是结果出来之后发现,坏死细胞特别多,凋亡的细胞就没几颗,而且散点图显示,细胞特别分散,我不知道这是个什么原因?
我的是贴壁细胞,我是在染完之后才消化的,然后直接用培养基终止消化,吹打成单个细胞,然后去检测;在染色之前我用多聚甲醛对细胞进行了固定?那这个固定队细胞坏死有没有很大影响呢?
Hoechst33342 它可以穿过活细胞的膜,区分凋亡和正常细胞,但在我做的流式结果里,怎么没有差别呢?求指点。谢谢啊
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lzl1987

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-16 14:45:38
你的最关键的问题是 用多聚甲醛固定了,固定之后,活细胞都变成了死细胞了。我觉得Hoechst33342/PI 双染这个试剂盒更适用于染色后在荧光显微镜下观察,我用过这个方法,在显微镜下观察。并且这个方法我们习惯是,细 ...

你好  请问你有没有做过DNA ladder。说明书上说要晚期凋亡的数目在30%以上 但是我要如何确定晚期以及早期的数目呢  谢谢
13楼2014-10-13 10:44:44
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