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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » DEAE sephadexs A-25填料
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I张小琴

铜虫 (小有名气)

[求助] DEAE sephadexs A-25填料

我用DEAE sephadexs A-25填料，是两年前经酸碱处理的一直保存在4℃、75%的乙醇中，那时用的效果不错，现在有些白色絮状或块状物，充分稀释溶解后，白色絮状或块状物还是存在，想问一下可能的原因。。。
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1楼 2012-06-14 10:37:17
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, 感谢应助，欢迎关注食品版，谢谢 2012-06-14 18:32:30
I张小琴: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-06-16 11:13:11
阴离子柱用后通常很脏，因为他会集合核酸等杂质，所以用后要及时处理，酸碱处理后要泡在20%乙醇中起到抑菌作用，你放在75%乙醇可能效果不好，而且放置这么久，乙醇浓度早会发降低了，估计长菌了。可以用0.2MNaOH浸泡3h左右，或者6MGuaHCl泡1-2h，在清洗一下。
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小小爬虫
2楼2012-06-14 15:30:16
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I张小琴

铜虫 (小有名气)
为了检测凝胶是否有用，我用平菇提取物经离心（之前有人做过实验，效果不错），再过阴离子交换柱，采用连续洗脱，结果有峰值，但有新问题，图如下：想知道8到22管为什么不是连续变化，是有两个蛋白没分开，还是在洗脱过程中柱子才被压实,还是其他的。。。。，求解哦!
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3楼2012-06-16 11:11:38
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I张小琴

铜虫 (小有名气)
图：
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4楼2012-06-16 11:16:33
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)
★ ★
树树8013: 金币+2, 继续奖励，谢谢对问题的持续关注，食品板块欢迎你常来。 2012-07-25 20:07:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by I张小琴 at 2012-06-16 11:16:33
图：
91/d8/1469636_1339816592_589.jpg

你这过的阴离子交换柱，有些蛋白本身靠盐梯度洗脱就不一定能分开，这与蛋白的pI性质有关；还有是不是有两个蛋白没有分开，还需要跑一下SDS电泳图才能确认，如果没分开也可能是你的梯度递增太快，前一蛋白还没完全洗下，而盐的浓度正好又达到后一蛋白洗脱值，于是峰型就连接了，你可以再拉大梯度洗脱。
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小小爬虫
5楼2012-07-24 12:27:37
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