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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小鼠FGF16(FGF家族)纯化中为什么总是浑浊，加点什么保护剂好
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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠FGF16(FGF家族)纯化中为什么总是浑浊，加点什么保护剂好

我现在毕业后纯化一种蛋白，是小鼠的FGF16，它可以和肝素柱结合，但是结合后总是沉柱，洗脱下来后也是浑浊的，而且加精氨酸保护剂也不行，只有加尿素为2M情况下还行，但是加尿素后我过分子筛又沉在分子筛上了，大家给点意见，可以加一些什么保护剂避免出现浑浊。如果有相关文献更好。
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1楼 2012-06-12 16:21:09
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是蛋白不稳定，形成包涵体了？测过PH值没有？除了缓冲液外可能还有别的影响因素……
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2楼2012-06-12 16:33:00
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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-12 16:33:00
是蛋白不稳定，形成包涵体了？测过PH值没有？除了缓冲液外可能还有别的影响因素……

可能是蛋白不稳定，它等电点在10左右，反正是碱性的，不应该是PH值问题，我用的是tris缓冲液，我见有的人用mops缓冲体系，但查了下也没多大区别。所以就想加点保护剂。我也见过文献说加精氨酸可增加其溶解度400倍，但是我因为纯化，蛋白浓度到了5mg/ml的浓度，蛋白总是浑浊
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3楼2012-06-12 16:40:13
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

蛋白不稳定过柱子不太好弄……你是打算进一步纯化还是？
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4楼2012-06-13 08:31:15
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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-13 08:31:15
蛋白不稳定过柱子不太好弄……你是打算进一步纯化还是？

纯化肯定还是要进行的，而且必须解决总是浑浊的问题，不稳定也是我猜测的，我还要纯化FGF3，FGF8，好几个FGF家族，但是都有沉柱问题，现在实在不行，我想用反向、相把他回收回来，只能试试了。但是有加稳定剂就能解决或其他方法解决最好。
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5楼2012-06-13 15:49:03
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个是不是疏水性很强的蛋白？如果是的话，可能加点去垢剂会好点，比如Triton之类的。
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6楼2012-06-13 16:58:23
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by fanyhongliu at 2012-06-13 15:49:03
纯化肯定还是要进行的，而且必须解决总是浑浊的问题，不稳定也是我猜测的，我还要纯化FGF3，FGF8，好几个FGF家族，但是都有沉柱问题，现在实在不行，我想用反向、相把他回收回来，只能试试了。但是有加稳定剂就能解 ...

你的蛋白没变性吧？先做一下检验找找原因吧。
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7楼2012-06-14 08:29:27
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