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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠FGF16(FGF家族)纯化中为什么总是浑浊,加点什么保护剂好

我现在毕业后纯化一种蛋白,是小鼠的FGF16,它可以和肝素柱结合,但是结合后总是沉柱,洗脱下来后也是浑浊的,而且加精氨酸保护剂也不行,只有加尿素为2M情况下还行,但是加尿素后我过分子筛又沉在分子筛上了,大家给点意见,可以加一些什么保护剂避免出现浑浊。如果有相关文献更好。
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是蛋白不稳定,形成包涵体了?测过PH值没有?除了缓冲液外可能还有别的影响因素……
2楼2012-06-12 16:33:00
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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-12 16:33:00
是蛋白不稳定,形成包涵体了?测过PH值没有?除了缓冲液外可能还有别的影响因素……

可能是蛋白不稳定,它等电点在10左右,反正是碱性的,不应该是PH值问题,我用的是tris缓冲液,我见有的人用mops缓冲体系,但查了下也没多大区别。所以就想加点保护剂。我也见过文献说加精氨酸可增加其溶解度400倍,但是我因为纯化,蛋白浓度到了5mg/ml的浓度,蛋白总是浑浊
3楼2012-06-12 16:40:13
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

蛋白不稳定过柱子不太好弄……你是打算进一步纯化还是?
4楼2012-06-13 08:31:15
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fanyhongliu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-13 08:31:15
蛋白不稳定过柱子不太好弄……你是打算进一步纯化还是?

纯化肯定还是要进行的,而且必须解决总是浑浊的问题,不稳定也是我猜测的,我还要纯化FGF3,FGF8,好几个FGF家族,但是都有沉柱问题,现在实在不行,我想用反向、相把他回收回来,只能试试了。但是有加稳定剂就能解决或其他方法解决最好。
5楼2012-06-13 15:49:03
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个是不是疏水性很强的蛋白?如果是的话,可能加点去垢剂会好点,比如Triton之类的。
6楼2012-06-13 16:58:23
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by fanyhongliu at 2012-06-13 15:49:03
纯化肯定还是要进行的,而且必须解决总是浑浊的问题,不稳定也是我猜测的,我还要纯化FGF3,FGF8,好几个FGF家族,但是都有沉柱问题,现在实在不行,我想用反向、相把他回收回来,只能试试了。但是有加稳定剂就能解 ...

你的蛋白没变性吧?先做一下检验找找原因吧。
7楼2012-06-14 08:29:27
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