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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 求大神分析实验结果-转化

对PCR产物进行加A尾，体系如下：
PCR产物：40ul
10XTaq Bufferz：5ul
dATP：4ul
Taq(2.5U/ul)：1ul
总体系：50ul
反应条件：72℃，1h
之后直接取加A尾的PCR产物进行连接，体系如下：
加A后PCR产物：2ul
pMD 19：0.5ul
Buffer（solution I）3.5ul
过夜连接：12-16h
之后用JM109感受态细胞进行转化
涂LE平板（1ml的100mg/ml 氨苄加入到1L的LB培养基）
昨天下午2点半涂完平板（100ul菌液）
37℃培养到晚上10点半，之后置于室温下（20℃）到今早，发现没长- -，请问各位大神，可能是哪个步骤出现了问题，PCR新手，望指教.
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1楼 2012-06-11 10:12:56
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
没人理麽
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2楼2012-06-12 20:48:19
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
过夜连接用的什么温度？室温吗？
赞一下 回复此楼
哦也
3楼2012-06-12 22:21:43
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