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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 求大神分析实验结果-转化

对PCR产物进行加A尾,体系如下:
PCR产物:40ul
10XTaq Bufferz:5ul
dATP:4ul
Taq(2.5U/ul):1ul
总体系:50ul
反应条件:72℃,1h
之后直接取加A尾的PCR产物进行连接,体系如下:
加A后PCR产物:2ul
pMD 19:0.5ul
Buffer(solution I)3.5ul
过夜连接:12-16h
之后用JM109感受态细胞进行转化
涂LE平板(1ml的100mg/ml 氨苄加入到1L的LB培养基)
昨天下午2点半涂完平板(100ul菌液)
37℃培养到晚上10点半,之后置于室温下(20℃)到今早,发现没长- -,请问各位大神,可能是哪个步骤出现了问题,PCR新手,望指教.
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

没人理麽
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-06-12 20:48:19
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过夜连接用的什么温度?室温吗?
哦也
3楼2012-06-12 22:21:43
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