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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

[交流] 开放阅读框移码突变问题

做转基因，载体构建的时候开放阅读框的其实密码子ATG前面多加了四个碱基，终止密码子后面多加了四个碱基，是不是表达不出我要的蛋白啊？之前问老师的时候，说是没有关系，现在都已经在筛选了，悲剧了。
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1楼 2012-06-09 14:50:07
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
no pro
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2楼2012-06-09 15:02:39
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
为什么要在ATG前面加四个碱基呢？是酶切位点么？移码突变了
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3楼2012-06-09 20:49:22
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
没问题，起始密码子和终止密码子中间这段没变就行
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4楼2012-06-10 02:27:03
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农科院523

金虫 (小有名气)
★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
没问题 还是从ATG 起始  没影响
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5楼2012-06-10 09:48:03
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
没问题，蛋白质编码是要核糖体从SD序列开始向下移动遇到的第一个ATG才开始编码（如果你5‘引入的含有ATG 你就有可能悲剧了。）
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6楼2012-06-10 14:26:37
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-11 13:47:26
具体需要结合载体和插入位点来考虑,因为一般的表达载体有设计好的起始密码子,相比其他可能的起始密码子,载体设计的密码子考虑了很多有利于表达的因素.所以,你要结合各方面来考虑,而不是只看自己的片段有没有改变.
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7楼2012-06-11 06:50:12
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
xiazhiwuxie(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-12 13:34:37
用的什么载体啊？要是载体前面有ATG那就不好办了，有可能就移码了。要是没有的话就没有问题。但是如果后面要加标签的话，也会有问题，到终止密码那里就提前终止了，后面的标签就没法表达了。
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8楼2012-06-11 20:54:20
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