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lixilei1314

金虫 (小有名气)


[交流] 克隆载体可以一直扩大培养吗?

克隆载体可以一直扩大培养吗?我的意思是表达载体可以转化到细菌里面保存,可以一直保存着用。那克隆载体是不是也可以直接转化到细菌里扩大培养?这样只要买一次,以后是不是就不用再买了。
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547star

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lixilei1314: 金币+4, 谢谢,长见识了。 2012-06-06 00:10:12
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-06 13:33:33
可以的,比如pUC克隆质粒,在蓝白反应平板上长的蓝色菌落可以挑出来培养提取质粒用于克隆.唯一需要注意的是多克隆位点可能会突变导致一些酶切位点消失,影响克隆,另外,一些突变会导致质粒提取出来的量变少.发现问题,比如酶切不开,提取得率低等就该换了.至于保持抗性和蓝白反应,这些问题容易排除.

[ Last edited by 547star on 2012-6-5 at 20:32 ]
3楼2012-06-05 20:30:00
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
lixilei1314: 金币+1, 辛苦!谢谢 2012-06-06 00:10:24
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 13:33:21
可以提质粒保存,这样保险,一直扩增质粒有丢失的可能,次数不多一般是没问题的,但是一定要维持一定的选择压力。
2楼2012-06-05 16:48:04
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PrinceFei

新虫 (初入文坛)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lixilei1314: 金币+1 2012-06-14 09:59:24
理论上是可以的  但是操作上要麻烦一些 转进去的载体稳不稳定 可能在扩大培养中质粒会丢失 转进去的更不稳定
4楼2012-06-13 19:02:52
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jqq1985

银虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lixilei1314: 金币+2, 谢谢! 2012-06-14 10:00:16
是这个意思。但是在扩大的过程中质粒也有可能出现少量的突变,如果突变出现在多克隆位点里面就比较糟糕了。所以尽量不要过度传代扩大,尽量保存最初的的质粒,尽量不要带菌保藏。
5楼2012-06-13 21:43:46
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