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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆载体可以一直扩大培养吗？
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lixilei1314

金虫 (小有名气)

[交流] 克隆载体可以一直扩大培养吗？

克隆载体可以一直扩大培养吗?我的意思是表达载体可以转化到细菌里面保存，可以一直保存着用。那克隆载体是不是也可以直接转化到细菌里扩大培养？这样只要买一次，以后是不是就不用再买了。
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caoluoyuan

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1楼 2012-06-05 16:44:22
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lixilei1314: 金币+4, 谢谢，长见识了。 2012-06-06 00:10:12
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-06 13:33:33
可以的,比如pUC克隆质粒,在蓝白反应平板上长的蓝色菌落可以挑出来培养提取质粒用于克隆.唯一需要注意的是多克隆位点可能会突变导致一些酶切位点消失,影响克隆,另外,一些突变会导致质粒提取出来的量变少.发现问题,比如酶切不开,提取得率低等就该换了.至于保持抗性和蓝白反应,这些问题容易排除.

[ Last edited by 547star on 2012-6-5 at 20:32 ]
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3楼2012-06-05 20:30:00
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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送鲜花一朵
lixilei1314: 金币+1, 辛苦！谢谢 2012-06-06 00:10:24
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 13:33:21
可以提质粒保存，这样保险，一直扩增质粒有丢失的可能，次数不多一般是没问题的，但是一定要维持一定的选择压力。
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2楼2012-06-05 16:48:04
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PrinceFei

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lixilei1314: 金币+1 2012-06-14 09:59:24
理论上是可以的  但是操作上要麻烦一些 转进去的载体稳不稳定 可能在扩大培养中质粒会丢失 转进去的更不稳定
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4楼2012-06-13 19:02:52
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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lixilei1314: 金币+2, 谢谢！ 2012-06-14 10:00:16
是这个意思。但是在扩大的过程中质粒也有可能出现少量的突变，如果突变出现在多克隆位点里面就比较糟糕了。所以尽量不要过度传代扩大，尽量保存最初的的质粒，尽量不要带菌保藏。
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5楼2012-06-13 21:43:46
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