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[求助]
求原核表达诱导表达具体操作？？？
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| 我选择的PET32a，把我差不多600bp的目的片段连入了pet32a。转化入表达菌株Rosset。下一步就是要做诱导表达了！可是我从来都没做过，还是有好多的细节不清楚啊！惶恐，求高人指点！我看别人的文章里用到1XPBS，2XSDS，不知道1XPBS和2XSDS的配方是怎样的？？Sample Text因为是差不多600bp，所以我的目的蛋白应该是21KD左右。不知道选择PET32a载体，前面是否会多编码一段蛋白啊？我的目的序列是从ATG开始的！我应该选择分离胶和浓缩胶的浓度各是多大喃？在SDS-PAGE过程中，缓冲液用的是什么啊？什么样的配方啊？我应该怎样安排对照比较好喃？有什么特别要注意的么？求高人指点！ |
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roomofxw
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【答案】应助回帖
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草帽小子: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢，有问题再请教！ 2012-06-04 16:52:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-07 13:44:44
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http://biotech.ou.edu/ 是预测可溶概率的，当然只是概率 首先看文献啊，别人做过或者类似蛋白是不是包涵体 然后就是跑电泳的时候啊，你跑的全菌，破菌上清，和破菌沉淀里面，目的条带在沉淀里面的，只要不是破菌没破开，那就是包涵体了 |
7楼2012-06-04 16:37:00
roomofxw
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