24小时热门版块排行榜    

查看: 2428  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

分子结构

金虫 (小有名气)

[求助] 今天你纯化蛋白了吗?跪求柱子挂不好的原因。。。。 已有1人参与

最近纯化蛋白,各种柱子搞得晚上睡觉都在过柱子。。。。做过纯化的童鞋,你们懂的。。。。。。
但是最近结果总不理想,我将样品脱盐后过Hitrap Q FF柱,穿透(前两个收集管中)中有时会有酶活,然后在第7、8、9管(盐浓度是14%左右)中我的蛋白就洗下来了,这种状况让我真的有点无能为力了。都不知道是何原因,该如何改进,我升高过pH,也挂不住。
我的缓冲液:20mM tris-hcl, 2MNacl+20mMtris-hcl.
希望各位纯化专家能给我解答一下,谢谢。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的,只是春天的一朵花,整个春天还是你的。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子结构

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-06-01 23:28:01
硫酸铵脱盐后有没有用氯化钡鉴定盐是否去除完全?这个酶的pH是多少?挂柱条件是什么?

如果是天然筛选的菌,这种酶有很多同工酶,有时pI值相差较大,是会出现一部分挂上,一部分没挂上。

离子交换条件很重要 ...

嗯,我试试,谢谢
永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的,只是春天的一朵花,整个春天还是你的。
9楼2012-06-02 18:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

分子结构

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sunsicheng at 2012-05-31 10:29:25
加油...

谢谢
永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的,只是春天的一朵花,整个春天还是你的。
3楼2012-05-31 10:41:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 欢迎来微生物板块交流哦^_^ 2012-06-02 10:40:57
你样品是什么成分?细胞破碎液?硫酸铵沉淀脱盐后?还是其它?
可能是过载了,不一定是你的蛋白过载,而是其它物质结合比你蛋白结合强,导致你的样品挂柱很少。
可以试下SP、或CM阳离子交换。或者高盐条件下去过疏水柱
关注我关注的
4楼2012-06-01 19:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子结构

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-06-01 19:10:50
你样品是什么成分?细胞破碎液?硫酸铵沉淀脱盐后?还是其它?
可能是过载了,不一定是你的蛋白过载,而是其它物质结合比你蛋白结合强,导致你的样品挂柱很少。
可以试下SP、或CM阳离子交换。或者高盐条件下去过疏 ...

纤维素酶粗酶液,经硫铵沉淀后脱盐的样品上柱。试过SP挂不上,无限郁闷中。
永远不要为失去的感到遗憾——你没有摘到的,只是春天的一朵花,整个春天还是你的。
5楼2012-06-01 19:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293求调剂 +5 zjl的号 2026-03-16 6/300 2026-03-17 10:13 by zhyzzh
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 304求调剂 +7 小熊joy 2026-03-14 7/350 2026-03-17 08:53 by 雾散后相遇lc
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
请填处理意见