24小时热门版块排行榜    

查看: 6115  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shwkx1987

新虫 (小有名气)


[交流] 就要被免疫荧光折磨疯了,大侠啊,求救啊!!!

从上学期开始做间接免疫荧光,染得是细胞角蛋白骨架。刚开始荧光太弱,摸索了好一阵子,这学期初终于能染好了。可从四月中开始,固定这一步出现了致命的问题,至今找不到好的解决办法。不知有没有有经验的同学可以指点一下啊
  我之前一直用的是-20度遇冷的100%甲醇在-20度固定十分钟,效果还好。可现在固定五分钟细胞就都收缩甚至直接就脱片了,实在不知道为何啊。用4%甲醛、多聚甲醛固定细胞都不会收缩,但严重影响抗体的结合,荧光极弱。
    现在是实验的关键阶段,出现这样的问题,就如晴天霹雳,这段时间快痛苦死了。求救啊!!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

免疫实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmeng

铁虫 (初入文坛)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
“只是在封闭液和抗体稀释液中含有。是不是需要加一步透化处理呢或者抗原修复”
我觉得问题出现在这里,triton-x100是一种表面活性剂,你用来浮抗体应该是结合不好的。我的经验是4%多聚甲醛固定好了以后,0.5%的triton-x100或者NP-40通透30min,然后PBS洗3次,封闭,孵育抗体。或许会好一点
仅个人经验
17楼2012-06-06 17:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

肖颖2009

铁虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是细胞状态不好啊,先把细胞状态调整好再说吧~
2楼2012-05-30 11:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwkx1987

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-05-30 11:12:07
是不是细胞状态不好啊,先把细胞状态调整好再说吧~

我也想到了,复苏了新的还是一样
4楼2012-05-30 12:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

废哥117

银虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你试一下用4%多聚甲醛固定然后再用甲醇固定
5楼2012-05-30 13:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:30 by C6CRn66RYYXS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:19 by C6CRn66RYYXS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:35 by YHiw1gou1Eda
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:02 by YHiw1gou1Eda
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:18 by YHiw1gou1Eda
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-10 01:40 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见