| 查看: 2224 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
dajiong金虫 (正式写手)
|
[求助]
构建克隆载体时出现的问题
|
|
| 从蓝白筛选过的平板上挑了三个阳性单克隆，摇菌过夜，第二天分别取菌液用PCR鉴定，发现只有一个出来了目的片段（1000bp左右的）。还有一个有片段但是只有500bp，还有一个压根没有目的片段……胶什么的都没问题，想知道是在哪一步出了问题。谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我将1质粒连在BK载体上，但是阳性克隆鉴定一直是阴性，什么原因呢
已经有6人回复
- 已知全长基因怎样克隆并构建表达载体
已经有8人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 在乳酸菌中克隆基因用什么载体？
已经有8人回复
- 克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？
已经有16人回复
- pMG36e 构建的奇怪现象
已经有29人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�
已经有10人回复
- 【求助/交流】求助关于载体多克隆位点改造
已经有8人回复
dajiong
金虫 (正式写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 1150.2
- 散金: 47
- 红花: 1
- 帖子: 329
- 在线: 266.9小时
- 虫号: 1615753
- 注册: 2012-02-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
送鲜花一朵 
10楼2012-05-24 21:37:27
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-24 13:53:24
dajiong: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-24 21:40:12
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-24 13:53:24
dajiong: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-24 21:40:12
| 我们实验室就一直在做这个，蓝白筛选平板上不一定全部都是阳性克隆，存在很多假阳性，所以会出现有的有目的片段，有的有插入片段但不是目的片段，或者有的压根就没有片段插入，你这个情况很正常。我们的做法是先放在4℃冰箱数个小时，假阳性就可以表现出来，但是也不能完全避免这种情况，进一步菌落PCR还是会有没有目的片段的现象。只要有一个克隆出来了就行，留一部分养着，另一部分拿去测序，就能确定克隆序列是否正确了。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2012-05-24 13:27:42
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2012-05-24 14:00:25
jasonwyb123
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 1229.6
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 29.5小时
- 虫号: 1751129
- 注册: 2012-04-12
- 专业: 蛋白质组学
4楼2012-05-24 15:02:12
