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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量sybrgreen染料荧光值大小的问题
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kyoya

金虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量sybrgreen染料荧光值大小的问题

最近在做荧光定量PCR实验，机器是罗氏480，sybrgreen染料是购买的伯乐的，看别人做的扩增曲线荧光信号的值大约在40左右，而自己的荧光信号却在110左右，是染料的原因吗？还有我的扩增曲线不是S型的，该怎么进行优化？谢谢大家了。
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1楼 2012-05-24 09:23:46
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ssp5178

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: , 鼓励交流 2012-05-25 18:56:47
西瓜: 金币+2, 补上…… 2012-05-25 18:56:56
你的荧光起跳太晚了，一般在15左右比较好，可能是模板中的浓度不高，引物设计问题或者是你的酶效率不好，这些问题都是可能的，你说的S型，是指过了对其增长期后的平台期，这也是因为你的荧光信号起跳时循环数高，还未达到平台期的原因，不过这样数据没问题，你应该不用循环结束的拷贝数吧，祝实验顺利！
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9楼2012-05-25 14:06:13
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zgb1982

木虫 (正式写手)
不太懂，我怎么觉得挺正常的
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2楼2012-05-24 09:33:34
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-25 18:56:19
你的曲线形式为linear,扩增曲线很正常啊。你要通过阈值设定来考察CT值的大小，光看荧光值的大小没什么实际意义。
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3楼2012-05-24 10:25:08
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 辛苦，又冒泡了哈 2012-05-24 13:50:25
其实你做的很好，如果不放心的话可以查看别人用同样机器扩增出来的曲线是什么样子的。我觉得是没什么问题
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4楼2012-05-24 11:21:58
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