应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » DNA 3' 5'问题
51/1返回列表
查看: 2332  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

暂定

金虫 (初入文坛)

[求助] DNA 3' 5'问题

小白求问各位大神：
1. DNA的5'端磷酸末端和3'羟基末端是正常情况下的吧？那何时会出现3'磷酸末端还有5'羟基末端？是用酶作用的么？哪些酶搞的？
2. lambda 外切酶切的是双链DNA的5' 磷酸化链，这个磷酸化是不是不同于DNA5'端本身有的磷酸末端？那它具体是什么意思呢？
3. 用酶切反应的时候，有一个酶的反应缓冲液，请问，稀释这个缓冲液是用什么呢？纯水？还是其它缓冲液？比如用于单链杂交成双链的PBS加镁缓冲液可以么？
4. 缓冲液怎么用呢，比如说我拿的是10倍的缓冲液，是不是我的DNA溶液有180微升时，就加20微升缓冲液，这样正好是1倍的缓冲液呢？


求问各位大神，助我解惑啊，多谢多谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Aptamer_Biosensor 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-23 11:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暂定

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-23 12:48:48:
嗯...................
       1. 是有酶作用的 比方说做RACE中就有用到碱性磷酸酶 可以作用脱掉5‘的磷酸基团
       2. 这个外切酶应该识别的是5’的磷酸化基团 （没有做过 个人理解）
       3. 你指的稀释是

我还想追问一下，嘿嘿，您告诉我说稀释不用缓冲液，但是例如第4个问题，我的DNA溶液是用PBS缓冲液配制的，那再往里加酶时，要怎么办呢？
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-23 14:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-05-23 14:07:46
暂定: 金币+5, ★★★很有帮助, 多谢您回答啦 2012-05-23 14:17:50
西瓜: MolEPI+1, 补上EPI。辛苦哈 2012-05-27 12:52:21
嗯...................
       1. 是有酶作用的 比方说做RACE中就有用到碱性磷酸酶 可以作用脱掉5‘的磷酸基团
       2. 这个外切酶应该识别的是5’的磷酸化基团 （没有做过 个人理解）
       3. 你指的稀释是用ddH2O来补足体系吧 这样的话一般灭菌蒸馏水或millipore级纯水就可以了 不用缓冲液的 用了缓冲液可能带来额外的离子和影响离子强度从而对酶切产生作用
       4. 正如你所说10X换算成1X就拿你的溶液/9的体积来添加缓冲液就可以了
       个人看法 若有说错请高手指点
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-05-23 12:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暂定 at 2012-05-23 14:19:32:
我还想追问一下，嘿嘿，您告诉我说稀释不用缓冲液，但是例如第4个问题，我的DNA溶液是用PBS缓冲液配制的，那再往里加酶时，要怎么办呢？

做酶有关的实验时 如果补足体系 均是使用ddH2O 不会用其他缓冲液的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

暂定
Let God do with it as He wills
4楼2012-05-23 14:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暂定

金虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-23 14:31:42:
做酶有关的实验时 如果补足体系 均是使用ddH2O 不会用其他缓冲液的

噢 那DNA也是用纯水溶的么？或者DNA是用酶的反应缓冲液溶的？
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-23 15:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +35 医学老男孩 2026-08-13 83/4150 2026-08-17 20:08 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭