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mche2005

木虫 (正式写手)

7-5-3

[求助] 在用液氮研磨样品提取DNA时，最需要注意什么问题？ 已有1人参与

在应用液氮研磨时，最需要注意哪些问题？
非常感谢。
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1楼 2012-05-23 09:28:47
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mche2005

木虫 (正式写手)

7-5-3
★ ★ ★
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-23 20:51:55
液氮研磨
1、        确定起始样品量，最好在0.5-1g。
2、        先把研钵预冷，往研钵内反复加入液氮，至少4－5次，使研钵充分预冷
3、        保持在液氮中研磨，待液氮量刚没过样品时，将其敲碎，并快速研磨。若液氮挥发，再补加一些液氮。研磨一定要充分，不要留下小块！液氮研磨的时候注意组织的变化，变成粉末状。
4、        在样品粉末解冻之前将粉末快速转入EP管，盖紧EP管后快速摇晃热裂解液。
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4楼2012-05-23 16:34:55
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mche2005: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的热心帮助。 2012-05-23 11:11:12
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-05-23 14:06:15
1、液氮的温度是-196℃，不要冻伤自己的手，带上手套。
2、用一个保温杯，大一点的，把液氮取出来放在保温杯里，盖上盖子。
3、然后用液氮将研磨棒和研钵预冷却。
4、将样品快速放入研钵中，快速研磨，在液氮挥发完 之前再加入液氮，一定不要让液氮挥发完或者样品呈现那种黏糊的状态，这样样品中DNA容易降解。
5、等到样品呈现细粉末状态了基本就可以了，用药勺把样品迅速舀到1.5ml离心管里 。等液氮挥发完再盖紧，不然样品会冲出去。然后把离心管保存到-20℃的冰箱。
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2楼2012-05-23 10:25:37
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还要记得加PVPP，这样可以吸附植物样品中的多酚。
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3楼2012-05-23 11:32:01
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longrna

新虫 (正式写手)
提DNA没什么问题。如果有样品可以多研一点，最后取进裂解液中取所需的适量即可。
注意多添几次液氮，使劲多研几次保证研粉了就好了。
不要想像得那么复杂。
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伟大航线....
5楼2012-05-23 17:17:45
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