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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[交流] 有构建过基因文库的帮帮忙

我想构建一个基因文库筛选酰胺酶。有几个问题需要请教：
1.实验室有含该酶的菌种一株，从ncbi中查找，类似该酰胺酶基因的大小为1000bp左右，我想知道我酶切时应该将酶切片段控制在多大？（想从该酶的活性方面进行筛选）
2.如果该原始菌株筛选时是以一种能利用某种特殊碳源的培养基筛选的（这种碳源可以被该酶特异性水解），我在基因文库筛选中可不可以也用这种方法进行重组后菌株的筛选。
万分感谢~~~

[ Last edited by xinmor on 2012-5-22 at 11:11 ]
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1楼 2012-05-20 20:22:49
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
hraikeyan: 回帖置顶 2012-05-20 22:17:08
看你用的载体了.如果是cosmid文库，插入片段在30-50k。如果构建亚基因文库，切个3-5kb就可以...
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4楼2012-05-20 21:54:40
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-05-20 21:54:40:
看你用的载体了.如果是cosmid文库，插入片段在30-50k。如果构建亚基因文库，切个3-5kb就可以...

如果建立亚基因文库，是不是不能保证目标基因能被表达？对后期筛选带来困难？
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-20 22:11:12
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-05-20 15:11:12:
如果建立亚基因文库，是不是不能保证目标基因能被表达？对后期筛选带来困难？

应该没什么太大困难...插入片段越小，需要挑的克隆子理论上越多...
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7楼2012-05-20 23:06:21
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王家大成

木虫 (正式写手)
hraikeyan: 回帖置顶 2012-10-30 16:35:38
因为插入片段越大。连接越困难。所以控制在3-10kb是很好的。完全可以构建一个合格的文库。
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8楼2012-05-21 12:14:35
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neu2342楼
2012-05-20 20:32  
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
neu2343楼
2012-05-20 20:33  
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
yingying15886楼
2012-05-20 22:13  
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
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