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sunshinejiao

新虫 (初入文坛)

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[交流] 请教关于MTT脾淋巴细胞增殖问题

Sample TextSample Text我做脾淋巴细胞增殖实验，无菌取脾，细胞浓度为2*10e6个/ml，96孔板，每孔100μL细胞，加入10μLConA（不同浓度）孵育72小时后，加入MTT（5mg/ml）再孵育4个小时，没有出现甲瓒结晶，在显微镜下观察，细胞还是透亮的，没有发生任何变化。我又做了一次试验，取完脾细胞，孵育20小时，直接加MTT，孵育4h，有甲瓒结晶，但是很少，而且细胞还是透亮的。我想请教各位，脾细胞在96孔板里，死细胞和活细胞怎么区分啊?我那细胞都是透亮的。还有我加入MTT没有甲瓒结晶，能说明我的细胞全部死亡了吗（MTT我用其他细胞验证过，没有问题）？非常感谢各位的回答!

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1楼2012-05-11 10:36:01

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gaorongbest

新虫 (小有名气)

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虫号: 1726688

★
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我看了你的实验后觉得有问题啊：1、取脾后要很多步骤才能得到淋巴细胞的（PBS冲洗就免说了，至少要用红细胞裂解液裂解红细胞、用Percoll分离液分离淋巴细胞）2、一个大鼠脾脏一般接种一个96孔板，每孔100μL细胞，我们的组织是提前用培养基浸润的；3、孵育4h，可以在显微镜下看到明显的蓝紫色4、因为淋巴细胞是半贴壁的，所以要把每孔细胞吸到EP管后离心，测OD值得

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