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604540357

金虫 (小有名气)

[交流] 怎样准确建立总黄酮的检测方法？

本人最近提取植物总黄酮，其主要成分含有芦丁、槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷等多种黄酮类化合物。经查阅《国药大典》，以芦丁作标样建立标准曲线： 精密称取芦丁25mg ，加甲醇定容至25 ml ，取10ml 并且用蒸馏水释至100 ml 。分别准确吸取0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6.0 ml 于25 ml 容量瓶中用10%甲醇定容各容量瓶至6ml，加含5 % NaNO2 水溶液1ml ，摇匀静置6 min ，再加含10 %Al (NO3) 3 水溶液1 ml ，摇匀静置6 min，再加含1. 0mol/L NaOH水溶液10 ml ，用蒸馏水稀释定容至刻度，摇匀静置16 min，在480～540 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长在508 nm处，得到芦丁浓度( x) 与吸光度( y) 的关系的回归方程。
    但是最后经过萃取和树脂纯化后，检测结果120%以上，试过很多次，都是100%以上，请问各位高人指点一二！！！！！
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小胡0905 yiwenbin

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1楼 2012-05-10 17:45:46
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qiute621

铜虫 (著名写手)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
换换其他显色的方法
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2楼2012-05-10 17:51:25
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biology-jlu

木虫之王 (文坛精英)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
纯度超过100了？不会吧？
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5楼2012-05-10 18:17:34
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zoupeng2046

金虫 (正式写手)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
谢谢楼主！
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7楼2012-05-10 18:27:38
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
路过的，瞅瞅！
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8楼2012-05-10 18:40:10
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抗氧剂

银虫 (正式写手)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
瞅瞅
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9楼2012-05-10 19:04:29
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顶贴少女

金虫 (著名写手)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
添人气的！
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10楼2012-05-10 19:07:50
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yangy1220

新虫 (职业作家)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
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13楼2012-05-10 19:27:37
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啄虫鸟

新虫 (著名写手)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
顶贴！
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14楼2012-05-10 19:42:47
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soyjle

铁虫 (小有名气)
★ ★
604540357(金币+1): 谢谢参与
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-11 14:10:08
多酚、酚酸类物质对测定有影响，可以尝试其他方法。
参考文献：
1.周春华,  孙崇德, 李鲜. 富含绿原酸的植物中类黄酮测定方法探讨. 植物生理学通讯,2007, 43(5): 902-904
2.何书美,刘敬兰. 茶叶中总黄酮含量测定方法的研究. 分析化学, 2007, 35(9): 1365-1368
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15楼2012-05-11 09:14:16
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小胡0905

银虫 (小有名气)
★ ★
604540357(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-11 14:09:57
亚硝酸钠-硝酸铝显色法测总黄酮是常用方法！
建议：1、溶液过滤后再测吸光度
      2、换用其它更为专属的显色方法来测含量，多查些文献
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16楼2012-05-11 09:26:12
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604540357

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by soyjle at 2012-05-11 09:14:16:
多酚、酚酸类物质对测定有影响，可以尝试其他方法。
参考文献：
1.周春华,  孙崇德, 李鲜. 富含绿原酸的植物中类黄酮测定方法探讨. 植物生理学通讯,2007, 43(5): 902-904
2.何书美,刘敬兰. 茶叶中总黄酮含量测 ...

谢谢 指点我看一下
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18楼2012-05-11 13:54:46
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604540357

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小胡0905 at 2012-05-11 09:26:12:
亚硝酸钠-硝酸铝显色法测总黄酮是常用方法！
建议：1、溶液过滤后再测吸光度
      2、换用其它更为专属的显色方法来测含量，多查些文献

亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法就是国标方法啊  我怀疑还是跟总黄酮中的成分有关系
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19楼2012-05-11 13:56:17
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xian2008

铜虫 (小有名气)
★
604540357(金币+1): 谢谢参与
由于样品未经分离纯化，样品中含有大量的原花色素等酚类物质干扰，该定量测定方法误差较大。建议换其他方法检测，例如，氯化铝-醋酸钾显色方法。
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20楼2012-05-11 14:36:59
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fenghaiyan82

木虫 (正式写手)
★ ★
604540357(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-14 09:41:00
建议使用AlCl3显色体系，以HAc-NaAc为缓冲溶液。
Al（NO3）3显色法，干扰物质较多。
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21楼2012-05-11 15:06:53
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604540357

金虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by fenghaiyan82 at 2012-05-11 15:06:53:
建议使用AlCl3显色体系，以HAc-NaAc为缓冲溶液。
Al（NO3）3显色法，干扰物质较多。

嗯 也我试试   谢谢你    你能不能告诉我  具体的原理 啊
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22楼2012-05-12 13:53:45
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zhangxiangyu

金虫 (小有名气)
★ ★
604540357(金币+1): 谢谢参与
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-26 19:11:45
对于您的问题，个人认为有可能是几个方面的原因
   1、实验仪器可能有问题，建议检查或者做空白看看。
   2、对于您说的纯化后达到120%，不知道您是怎么算的，是否计算有误？
   4、芦丁表样是否有问题？
   5、一般如果相隔时间比较长的话，您的标准曲线建议重新做。
   6、显色剂的选择不对也有可能出现问题。
建议各个排除后解决问题。
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23楼2012-05-13 19:27:11
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yiwenbin

禁虫 (正式写手)
★ ★
604540357(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
xiaoxiao270: 金币+1, 3q 2012-05-26 19:11:52
本帖内容被屏蔽
24楼2012-05-13 23:07:42
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sunjian于

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoxiao270: 金币+1, 3q 2012-05-26 19:11:58
标准液的配制是不是有问题啊
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25楼2012-05-19 15:18:16
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604540357

金虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by xian2008 at 2012-05-11 14:36:59
由于样品未经分离纯化，样品中含有大量的原花色素等酚类物质干扰，该定量测定方法误差较大。建议换其他方法检测，例如，氯化铝-醋酸钾显色方法。

你有氯化铝-醋酸钾显色方法的具体步骤吗？
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26楼2012-05-25 15:18:24
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liushun0728

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
按照药典的方法试试。。。
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27楼2012-05-25 16:00:27
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lrbdtc

银虫 (小有名气)
果断质谱了
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28楼2012-05-25 16:34:17
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cll868

至尊木虫 (著名写手)
我以前也是这么做得啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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29楼2012-05-25 23:11:37
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slshihao

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-26 19:12:07
标曲相关系数多少，有超过其线性范围吗
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30楼2012-05-26 10:23:22
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604540357

金虫 (小有名气)
引用回帖:
30楼: Originally posted by slshihao at 2012-05-26 10:23:22
标曲相关系数多少，有超过其线性范围吗

R=0.9992   A在0.2-0.86之间啊   我打算换方法试试
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31楼2012-05-30 23:41:45
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yilishanshan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
多找些文献，再研究下
最近我也在做总黄酮，头痛呀，这个东西太粗了，影响因素太多，我就连对照品都还没选好，芦丁不行呀！
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32楼2012-05-30 23:52:40
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liugod0814

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也碰到了............感觉总黄酮的这些检测方法都太粗了
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33楼2013-11-25 20:24:22
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wangli-

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我可以弱弱的说一句这个方法是不科学的吗？标曲是芦丁，总黄酮里却不只是芦丁，难道槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷等多种黄酮类化合物的最大吸收波长都在508nm吗？我觉得不合理。还有就是显色时间，待测物质的浓度（线性范围）需要注意。待测溶液颜色不能太深，要接近标曲时芦丁溶液浓度，溶液要澄清透亮，否则结果会偏大。尽量用石英吧。我做过总黄酮和多糖（混合物）测定，重现性很不好。
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34楼2013-11-26 21:44:00
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wangli-

新虫 (初入文坛)
芦丁标曲不难做，关键是样品处理。
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35楼2013-11-26 21:45:16
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wang95278729

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问楼主最终如何解决的问题
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36楼2015-08-18 14:25:28
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215627

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问楼主怎么解决的问题 ，我现在也遇到了这样的问题
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37楼2018-05-27 15:51:13
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xachenxi3楼
2012-05-10 17:52   回复  
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我不搞学术4楼
2012-05-10 18:03   回复  
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sesame_oil6楼
2012-05-10 18:19   回复  
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bestyqs11楼
2012-05-10 19:17   回复  
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wlxwlx102612楼
2012-05-10 19:21   回复  
604540357(金币+1): 谢谢参与
83996778117楼
2012-05-11 10:50   回复  
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