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金虫 (小有名气)

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帖子: 92
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虫号: 984881

[交流] 怎样准确建立总黄酮的检测方法？

本人最近提取植物总黄酮，其主要成分含有芦丁、槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷等多种黄酮类化合物。经查阅《国药大典》，以芦丁作标样建立标准曲线：精密称取芦丁25mg ，加甲醇定容至25 ml ，取10ml 并且用蒸馏水释至100 ml 。分别准确吸取0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6.0 ml 于25 ml 容量瓶中用10%甲醇定容各容量瓶至6ml，加含5 % NaNO2 水溶液1ml ，摇匀静置6 min ，再加含10 %Al (NO3) 3 水溶液1 ml ，摇匀静置6 min，再加含1. 0mol/L NaOH水溶液10 ml ，用蒸馏水稀释定容至刻度，摇匀静置16 min，在480～540 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长在508 nm处，得到芦丁浓度( x) 与吸光度( y) 的关系的回归方程。
但是最后经过萃取和树脂纯化后，检测结果120%以上，试过很多次，都是100%以上，请问各位高人指点一二！！！！！

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1楼2012-05-10 17:45:46

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wangli-

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 6
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虫号: 2357651

★
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我可以弱弱的说一句这个方法是不科学的吗？标曲是芦丁，总黄酮里却不只是芦丁，难道槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷等多种黄酮类化合物的最大吸收波长都在508nm吗？我觉得不合理。还有就是显色时间，待测物质的浓度（线性范围）需要注意。待测溶液颜色不能太深，要接近标曲时芦丁溶液浓度，溶液要澄清透亮，否则结果会偏大。尽量用石英吧。我做过总黄酮和多糖（混合物）测定，重现性很不好。