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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 体外抗氧化（清除羟自由基）--邻二氮菲法
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505263584

木虫 (小有名气)

[求助] 体外抗氧化（清除羟自由基）--邻二氮菲法

请教做过实验的虫子，我用的是Fe2＋/H2O2体系产生羟自由基，显色剂为邻二氮菲。
预实验一直遇到的问题是未损伤管（只有亚铁离子和显色剂）和损伤管（加H2O2）显色后没什么区别，使用VC做对照，对照管颜色稍深，但是在510nm处测得的吸收值小于未损伤管，所以照此计算，清除率为负！想请问的有如下几点：
1、损伤管应不应该显红色？如果亚铁离子全部被H2O2氧化为高铁离子，跟显色剂络合应该显浅蓝色啊
2、试剂添加顺序到底是怎样的？最后加显色剂还是H2O2？
3、缓冲液的PH，文献集中在7.4和3.0两个数据，老师的要求是最好跟人体体液环境一致，比较有参考意义！
4、各试剂浓度设置是否有要求？附上我的试剂浓度：硫酸亚铁（7.5mM，1ml）;显色剂（7.5mM，1ml）;PBS（0.1M，1ml）;H2O2（0.06%，约为20mM，1.5ml），最终加水稀释至10ml。
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1楼 2012-05-09 16:49:16
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505263584

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomo3511 at 2012-10-31 10:16:34
加试剂的顺序是 pbs＋显色剂+硫酸亚铁+样品+双氧水~！

恩，确实后来是按照这个顺序做的！谢谢
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3楼2012-10-31 16:46:55
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xiaomo3511

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
505263584: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回复 2012-10-31 16:47:27
加试剂的顺序是 pbs＋显色剂+硫酸亚铁+样品+双氧水~！
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2楼2012-10-31 10:16:34
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你木子

新虫 (初入文坛)
我今天做的，损伤管（0.433）也是红色，只是比未损伤（1.057）颜色浅一些，问题是我的样品管的吸光值也比损伤管小，算出来也是负值，忧伤。试剂浓度：硫酸亚铁（7.5mM，1ml）;显色剂（5mM，1ml）;PBS（0.2M，5ml）;H2O2（0.1%，1ml）；样2ml。
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4楼2015-05-28 16:45:32
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csc_36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 你木子 at 2015-05-28 16:45:32
我今天做的，损伤管（0.433）也是红色，只是比未损伤（1.057）颜色浅一些，问题是我的样品管的吸光值也比损伤管小，算出来也是负值，忧伤。试剂浓度：硫酸亚铁（7.5mM，1ml）;显色剂（5mM，1ml）;PBS（0.2M，5ml）; ...

前辈，请问您这个问题后来怎么解决的？

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5楼2016-04-27 09:04:33
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