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505263584木虫 (小有名气)
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体外抗氧化（清除羟自由基）--邻二氮菲法
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请教做过实验的虫子，我用的是Fe2＋/H2O2体系产生羟自由基，显色剂为邻二氮菲。 预实验一直遇到的问题是未损伤管（只有亚铁离子和显色剂）和损伤管（加H2O2）显色后没什么区别，使用VC做对照，对照管颜色稍深，但是在510nm处测得的吸收值小于未损伤管，所以照此计算，清除率为负！想请问的有如下几点： 1、损伤管应不应该显红色？如果亚铁离子全部被H2O2氧化为高铁离子，跟显色剂络合应该显浅蓝色啊 2、试剂添加顺序到底是怎样的？最后加显色剂还是H2O2？ 3、缓冲液的PH，文献集中在7.4和3.0两个数据，老师的要求是最好跟人体体液环境一致，比较有参考意义！ 4、各试剂浓度设置是否有要求？附上我的试剂浓度：硫酸亚铁（7.5mM，1ml）;显色剂（7.5mM，1ml）;PBS（0.1M，1ml）;H2O2（0.06%，约为20mM，1.5ml），最终加水稀释至10ml。 |
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