| 查看: 1543 | 回复: 6 | ||
涛涛不绝1988新虫 (初入文坛)
|
[求助]
鱼类线粒体DNA的提取 已有1人参与
|
|
我最近在做鱼类线粒体DNA的提取，用的常规的碱裂解法提取的，提了7、8次了，但是跑完胶之后除了Maker什么也没有，急啊~ 求高手帮忙分析一下，谢了！ （具体步骤：1、取动物组织2-8g，用SE缓冲夜漂洗，剪碎，加入约30mlSE缓冲液，0℃匀浆,1500rpm 10min,取上清 12000rpm 15min，沉淀物为线粒体，用STM溶液洗一遍。 2、以溶液体积与组织重量0.2ml:1g的STM溶液悬浮线粒体，加DNaseA溶液，（终浓度达到100ug/ml）30℃水浴30min,加EDTA溶液（至终浓度10mmol/L）摇匀，10000rpm 10min，沉淀即线粒体。 3、取部分线粒体用Janus Green B染色并观察线粒体的数目、大小。 4、剩余的线粒体用SE缓冲液洗一遍，然后用4mlSE溶液悬浮纯净线粒体，均分于4支EP管中。 5、12000rpm 10min；弃上清液，每管加150ulTEN溶液，悬浮沉淀，各加入300ul新配制的溶液Ⅴ，混合均匀，冰浴10min；再各加入225ul冷的KAc溶液，冰浴30min。 6、12000rpm 10min，取上清液; 加人与上清液等体积的饱和酚, 轻摇15min; 12000rpm 10min,取上清液; 加人与上清液等体积的氯仿-异戊醇(24 : 1 ) ,充分混合均匀，轻摇15min。12000rpm 10min, 吸取水相。 7、加入1/10体积的3mol/L、PH5.2的醋酸钠，再加入两倍体积无水乙醇，冰浴30min，12000rpm 10min,加入冷的（0℃）70%乙醇溶液洗一次，12000rpm 2min。自然干燥3-4 h或4℃ 冰箱中过夜彻底干燥；加入适量TE完全溶解。 8、加入DNase-free的RNaseA溶液（终浓度200ul/ml），37℃消化60min。重复步骤6和7。 9、取一部分溶液检测mtDNA的纯度和浓度，其余-20℃备用。） |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有235人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT)
已经有10人回复
- DNA的提取简介，包括法医DNA的提取方法！
已经有54人回复
- 求助叶绿体线粒体分离提取
已经有11人回复
- 提取线粒体DNA
已经有7人回复
- 线粒体DNA纯化前亮带单一，纯化后出现亮暗各一条带
已经有10人回复
- 【求助】【急】请问有谁做过细胞核STR分型检测和线粒体DNA测序？急求详细方法！
已经有15人回复
- 【求助/交流】线粒体的提取及活性检测
已经有8人回复
- 【求助】从细胞中提取的线粒体还能保持原有的生理活性吗？
已经有10人回复
xiayuling
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1609.1
- 红花: 1
- 帖子: 123
- 在线: 47.9小时
- 虫号: 1792856
- 注册: 2012-05-03
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2012-05-09 10:14:26
涛涛不绝1988
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 54
- 帖子: 8
- 在线: 8.5小时
- 虫号: 1287390
- 注册: 2011-05-06
- 性别: GG
- 专业: 男性生殖系统炎症与感染
3楼2012-08-17 19:46:23
mitocam
新虫 (正式写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 1114.5
- 散金: 93
- 红花: 2
- 帖子: 728
- 在线: 152.1小时
- 虫号: 1899939
- 注册: 2012-07-19
- 专业: 细胞呼吸与代谢
4楼2012-08-18 05:55:15
xiayuling
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1609.1
- 红花: 1
- 帖子: 123
- 在线: 47.9小时
- 虫号: 1792856
- 注册: 2012-05-03
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2012-08-18 17:24:44
涛涛不绝1988
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 54
- 帖子: 8
- 在线: 8.5小时
- 虫号: 1287390
- 注册: 2011-05-06
- 性别: GG
- 专业: 男性生殖系统炎症与感染
6楼2013-08-31 10:17:38
7楼2014-05-11 22:01:53
