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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC梯度洗脱分离度不好，麻烦给点建议啊
汕头大学海洋科学接受调剂
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651493221

银虫 (初入文坛)

[求助] HPLC梯度洗脱分离度不好，麻烦给点建议啊

用C18柱，流动相0.04%甲酸-90%乙腈，采用梯度洗脱，程序为：
90%乙腈  0-15min,28-38%,    15-40min，38-38，40-45min，38-28。
色谱图如下:
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1楼 2012-05-04 11:59:40
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jiangchunyong: 金币+1, 谢谢 2012-05-04 13:51:49
你是想分开第二个图的主峰与后面的峰？分离度有多少啊？可以把梯度再升慢一点试试。
两个图不是一个样品进的吧？第二个图是你破坏的样品？主峰都破坏没了？是不是破坏力度太大了，建议调到合适的破坏程度后再来调整方法。
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1234
2楼2012-05-04 13:19:23
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zigang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10-20分走一个梯度，时间长一些可能会有改善
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3楼2012-05-04 13:51:13
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zigang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

好像没表达清楚，我的意思是在38%（出峰时的比例）左右走一个小一点的梯度，时间拉长一些，希望会有帮助。
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4楼2012-05-04 13:57:06
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651493221

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wddmq at 2012-05-04 13:19:23:
你是想分开第二个图的主峰与后面的峰？分离度有多少啊？可以把梯度再升慢一点试试。
两个图不是一个样品进的吧？第二个图是你破坏的样品？主峰都破坏没了？是不是破坏力度太大了，建议调到合适的破坏程度后再来调 ...

第一个图是对照品，第二个是样品，进的是中药，成分比较复杂，并且含量太低，与旁边的大峰分离不开
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5楼2012-05-04 14:46:26
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651493221

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zigang at 2012-05-04 13:57:06:
好像没表达清楚，我的意思是在38%（出峰时的比例）左右走一个小一点的梯度，时间拉长一些，希望会有帮助。

可不可以这样子改：0-10min,28-33;   10-20,33-38;   20-40,38-38;  40-45,38-28  我只是需要16min后面的那个小峰，用外标法做含量测定，只要这个峰的分离度好，是不是其他峰可以不管了呢
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6楼2012-05-04 15:07:35
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
起始比例28%可以调高一点，比如32%~38%，或时间稍微延长2min；15-40min，时间可以缩短一点，到35min。
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守候在风中的宁静。
7楼2012-05-04 15:36:45
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xinyue2011

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我这里的事安捷伦1260  可以再调整一下梯度吧 尽可能找到最有影响的梯度
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8楼2012-05-05 18:36:09
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远哥不傻b

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

将你主峰那一部分的浓度比细分一下，先梯度，再等度，然后再梯度，这样试试看呢？

比如：28-35% 10min，35-37%10min，37-37%20min，37-40%10min  。。。    have a try~
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太豪爽、太豪放、第一杯都把酒端上！大火炕、摸着烫、像咱性格一个样！热心肠、爱帮忙、有话不往肚里藏！叫声老铁别慌今后啥事咱都一起抗！
9楼2012-12-20 14:38:22
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