应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 考马斯亮蓝法测定蛋白过程中的问题
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 3555  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-12 13:11:42
1.我们做标曲用的BSA是冷冻保存的，加样是将样品稀释到标曲范围内后加入50ul。
2.你的蛋白不稳定的话最好也冷冻保存。
3.考马斯染液反应时间为5min，反应5min读数就行。

恩 谢谢。。 我做标曲的BSA是4°保存的。提取的蛋白也是4°保存。只是考马斯染液反应时间我设置的是10min，下次改换5min试试。不过，你说的将样品稀释到标曲范围后再加入50ul是什么意思啊？？我一般就是提取土壤里面的蛋白以后，直接加100ul，并没有对其进行稀释。。
赞一下 回复此楼
努力，把一切当成兴趣！
11楼2012-06-12 14:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuxueyan21: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-12 17:17:16
蛋白的浓度测定需要在标曲的范围内，超过范围后测定的数值误差大的就失去参考价值了。加50ul和加100ul其实是一样的，浓度不在标曲范围内需要稀释后再取100ul测定会准确些。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liuxueyan21
12楼2012-06-12 15:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-12 15:08:00
蛋白的浓度测定需要在标曲的范围内，超过范围后测定的数值误差大的就失去参考价值了。加50ul和加100ul其实是一样的，浓度不在标曲范围内需要稀释后再取100ul测定会准确些。

好的 谢谢哈。。下次试试看。。
赞一下 回复此楼
努力，把一切当成兴趣！
13楼2012-06-12 17:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zfhist

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuxueyan21 at 2012-06-12 09:16:00
你说的冷冻保存是什么条件下保存啊？？-20°么？？...

-4即可，保存七天左右没问题。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liuxueyan21 liuxueyan21
认认真真做人，踏踏实实做事！
14楼2012-06-12 20:28:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by zfhist at 2012-06-12 20:28:11
-4即可，保存七天左右没问题。...

恩 好的 谢谢哈！
回复此楼
努力，把一切当成兴趣！
15楼2012-06-12 21:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by zfhist at 2012-06-12 20:28:11
-4即可，保存七天左右没问题。...

恩 好的 谢谢哈！
回复此楼
努力，把一切当成兴趣！
16楼2012-06-12 21:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengjg
引用回帖:
5楼: Originally posted by protein_ at 2012-06-08 10:23:05
考马斯亮蓝测定蛋白质的原理是测定蛋白质疏水基团的数量来定蛋白质含量，有一定的误差，随着时间的推移有可能你的样品中的蛋白质可能在分解，样品做出来肯定要冷冻，你可以一次多做点平行，真不行就定氮测定，就是麻 ...

17楼2012-06-12 23:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

标准曲线一般重新做比较准确。我们取样总体积是250ul不知道你们的是不是。而且要稀释一定倍数然后再反应5分钟等连续几次读数稳定后，让读数在0.2-0.8之间，记录吸光度值，再用公式计算下。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liuxueyan21
18楼2012-06-13 16:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-13 16:02:15
标准曲线一般重新做比较准确。我们取样总体积是250ul不知道你们的是不是。而且要稀释一定倍数然后再反应5分钟等连续几次读数稳定后，让读数在0.2-0.8之间，记录吸光度值，再用公式计算下。

我们这我是第一个做这东西，都是自己在摸索。我从来没有稀释过，你说的连续几次读数稳定是什么意思啊？？
赞一下 回复此楼
努力，把一切当成兴趣！
19楼2012-06-13 16:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zfhist

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by liuxueyan21 at 2012-06-12 09:14:41
我4°放置的时间也不长，最多的也就四五天，最悲催的是，我有一次提取完成了以后，第二天测定的，结果全是负值。。...

一方面可以检查是不是机器故障，如基线没有归零；
另一方面样品总量是不是足够；一般鲜重以0.5g为宜。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liuxueyan21
认认真真做人，踏踏实实做事！
20楼2012-06-14 19:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuxueyan21 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭