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liuxueyan21金虫 (小有名气)
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[求助]
考马斯亮蓝法测定蛋白过程中的问题
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各位师兄师姐，紧急求助，就是用考马斯亮蓝法测定土壤蛋白，但是不管是预实验还是正式试验，测定的结果并不相同，尽管重复了很多次，不知道问题出哪里了？忘各位师兄师姐帮帮忙。 1、标准曲线时，BSA是需要每次测定都要重新配制吗？在测样品的时候是直接加100ul待测样品，其他与标准曲线一样。 2、提取的土壤蛋白储存在4°冰箱中，放置一个礼拜左右，对测定结果有影响么？还是会有蛋白变性的可能性？还是提取完成后放置在-20°条件？ 3、考马斯染液反应时间为10min，并在一个小时之内测定完成，这个时间是不是有问题？ |
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kedaxiaoyu
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【答案】应助回帖
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zhang8826857: 金币+1, 欢迎常来微生物板块^_^ 2012-06-12 22:22:35
zhang8826857: 金币+1, 欢迎常来微生物板块^_^ 2012-06-12 22:22:35
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1.我们做标曲用的BSA是冷冻保存的，加样是将样品稀释到标曲范围内后加入50ul。 2.你的蛋白不稳定的话最好也冷冻保存。 3.考马斯染液反应时间为5min，反应5min读数就行。 |
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liuxueyan2110楼2012-06-12 13:11:42
kedaxiaoyu
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【答案】应助回帖
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liuxueyan21: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-12 17:17:16
liuxueyan21: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-12 17:17:16
| 蛋白的浓度测定需要在标曲的范围内，超过范围后测定的数值误差大的就失去参考价值了。加50ul和加100ul其实是一样的，浓度不在标曲范围内需要稀释后再取100ul测定会准确些。 |
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12楼2012-06-12 15:08:00