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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 考马斯亮蓝法测定蛋白过程中的问题
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liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
20楼: Originally posted by zfhist at 2012-06-14 19:02:18
一方面可以检查是不是机器故障，如基线没有归零；
另一方面样品总量是不是足够；一般鲜重以0.5g为宜。...

我测定的是土壤里面的蛋白，需要过2mm筛，所以样品需要风干以后，才能进行测定，不过风干后的样品质量用的是0.5g。
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21楼2012-06-15 08:27:55
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无限美好

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大哥，测得时候你的温度要在室温，也就是必须要和标准曲线时，的温度一样。离心去掉杂质！有些蛋白要在3000r的转速下才得，不知道你的蛋白要多少了，自己试。还有呢，陪考马斯亮蓝的时候乙醇的量可是会影响的哦，一定要准确配置。
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liuxueyan21
未婚
22楼2012-06-28 00:05:05
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liuxueyan21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by 无限美好 at 2012-06-28 00:05:05
大哥，测得时候你的温度要在室温，也就是必须要和标准曲线时，的温度一样。离心去掉杂质！有些蛋白要在3000r的转速下才得，不知道你的蛋白要多少了，自己试。还有呢，陪考马斯亮蓝的时候乙醇的量可是会影响的哦，一 ...

恩 我再试试看 我测的温度就是室温下测的 跟标准曲线一样的。
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23楼2012-06-28 09:07:50
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

配制好BSA后，可以分装-20保存一部分，不用每次都配，但每次用的最好一次用掉，避免反复冻融。
蛋白样品一般放在-70吧。4度肯定不行
考马斯一般5-25分钟效果最好
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
24楼2013-08-29 20:44:41
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