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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增曲线不平滑是怎么回事？
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w.king124

金虫 (正式写手)
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50楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-07 14:59:45:
麻烦请问 您那是否有这几个仪器的相关的资料呢？

我这边手里倒是有一些资料，480的使用手册有的，RGQ的也有，ABI系列的不全，可以一起交流一下…………另外高手那真是谈不上，只是最近才学了点仪器的知识，互相学习
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51楼2012-05-07 20:10:30
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sajapple

新虫 (初入文坛)
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请问一下你的问题最终是怎么解决的呢，我现在也出现类似的问题了，我用的是染料法，同样条件，普通pcr上有扩增，做Qpcr无扩增曲线，产物电泳也无产物。
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52楼2013-05-09 19:29:28
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sugarzZ

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52楼: Originally posted by sajapple at 2013-05-09 19:29:28
请问一下你的问题最终是怎么解决的呢，我现在也出现类似的问题了，我用的是染料法，同样条件，普通pcr上有扩增，做Qpcr无扩增曲线，产物电泳也无产物。

做QPCR的Master Mix 有没有问题，或者QPCR机器和程序有什么问题……
你可以试试用普通PCR的Master Mix在QPCR仪上跑个QPCR程序试试，不用收集荧光信号。
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53楼2013-07-09 09:16:46
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w.king124

金虫 (正式写手)
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41楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-06 23:48:11
嗯......................
       我用过TOYOBO和Invitrogen公司两种Mix 均是直接加入的，TOYOBO产品没有直接注明 Invitrogen公司会写含ROX的XXXXX让人一目了然，并非是ABI的用而其他仪器不用，据我所知大多数仪器 ...

伯乐、凯杰、罗氏的仪器都无需Rox校正的，和检测器的类型、检测原理相关，而非不支持ROX，激发和检测ROX的滤光片都有的，要检测也是可以的
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54楼2013-07-09 13:18:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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首先ABI的机器推荐你用TAKARA公司的Mix，我们做过对比试验，这个mix可以说是目前世界上最好的mix之一，使用20ul反应体系即可。还有7500机器延伸时间最好不要低于30s，因为机器在这一步收集荧光信号，时间太短的话你自己应该也能想明白为什么不好。强烈要求你把反应体系中共同的成分配制成mix，然后统一分装到8连管或者96孔板内，这样可以最大限度的减少实验误差。最后一点，上机前一定要短暂离心。
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55楼2013-07-09 14:44:27
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jl.liu

新虫 (初入文坛)
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机器问题，或引物不行，看图是有扩增的，但效率太低了
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56楼2015-09-03 16:28:46
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