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可帅儿

银虫 (正式写手)

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[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。

配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。

这是4个重复的反应，用的是50ul体系

这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好

[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]

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1楼 2012-04-17 15:30:17

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w.king124

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

41楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-06 23:48:11
嗯......................
我用过TOYOBO和Invitrogen公司两种Mix 均是直接加入的，TOYOBO产品没有直接注明 Invitrogen公司会写含ROX的XXXXX让人一目了然，并非是ABI的用而其他仪器不用，据我所知大多数仪器 ...

伯乐、凯杰、罗氏的仪器都无需Rox校正的，和检测器的类型、检测原理相关，而非不支持ROX，激发和检测ROX的滤光片都有的，要检测也是可以的

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54楼2013-07-09 13:18:32

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可帅儿

银虫 (正式写手)

应助: 14 (小学生)
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虫号: 1639660

哎~~自己来顶顶！求大神指点(⊙o⊙)哦

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2楼2012-04-19 13:44:05

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chlorella409

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虫号: 1600249

★ ★ ★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-04-19 17:27:17

首先我认为扩增曲线不光滑可能时因为还在基线期，其次，你要加溶解曲线的话可以在experiment menu的experiment properties里面选择检测试剂SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打钩，第三，工作液可以先mix再分到每个孔里，cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]

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3楼2012-04-19 15:53:18

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