24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2715  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot实验技术

刚开始煮蛋白会起泡泡,溢出正常么?还有我的目的蛋白是75KD我250mA的电流转膜一个半小时可以将目的蛋白转过去么?显影的时候我的内参条带很好,但是目的蛋白没有,是什么原因?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by flownaway at 2012-05-19 23:05:09:
有没有可能是抗体失效,稀释得太稀,或者蛋白的表达量不够?显影液使用太久效果也会变差

我的抗体是三月底刚买的。稀释是1:200的,推荐的稀释比例是1:200-1:1000,显影液的话我是用两次就换新的了。我的蛋白表达丰度没有具体报道,但是文献上上样20ug就可以做出来了,我上样好几百ug才只有很淡的条带,会不会是一抗的特异性很低啊?
13楼2012-05-20 10:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

sxwsp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 15:28:36
内参45左右,而你的蛋白75,应该不是转膜的问题。一个班小时足够了。目的蛋白没有显影的最大可能就是抗体,抗体不行或者孵抗条件不对
2楼2012-04-22 13:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-12 15:28:52
煮样冒泡正常啊,用封口膜封好就行了。另外想知道转膜有没有问题直接点个预染marker,看看预染marker转的效果不就知道了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

scienceguy
3楼2012-04-22 22:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hellolin at 2012-04-22 22:57:47:
煮样冒泡正常啊,用封口膜封好就行了。另外想知道转膜有没有问题直接点个预染marker,看看预染marker转的效果不就知道了。

先谢谢啦,我用了预染marker,marker 都转过去了的。现在,目的条带有显出来,但是很淡,而且背景很高,今天延长了封闭时间和降低了二抗浓度,背景市有所降低,但是目的条带变的更淡了,不知道是不是二抗的特异性不好呢?
4楼2012-05-10 23:20:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +12 梁富贵险中求 2026-04-04 12/600 2026-04-06 22:54 by chenzhimin
[考研] 328求调剂 +3 ghhh88888 2026-04-06 3/150 2026-04-06 21:35 by 啵啵啵0119
[考研] 269电子信息求调剂,可转专业 +5 独酌wl 2026-04-06 5/250 2026-04-06 17:23 by 土木硕士招生
[考研] 081700,311,求调剂 +16 冬十三 2026-04-04 17/850 2026-04-06 14:56 by 尚水阁主
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 316求调剂 +5 yyx想调剂 2026-04-05 5/250 2026-04-05 22:22 by 咔咔咔咔9
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 329求调剂 +17 miaodesi 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 18:33 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 341求调剂 +3 洛多罗 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:36 by 智能智慧
[考研] 一志愿中国石油大学化学工程323分求调剂 +4 化工专硕323分 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:12 by dongzh2009
[考研] 301求调剂 +14 A_JiXing 2026-04-01 14/700 2026-04-03 18:31 by ls刘帅
[考研] 085501一志愿天工大,机械专硕求调剂,跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
信息提示
请填处理意见