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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 09:07:14
煮沸冒泡的可能性比较大，建议用管子时在管盖上扎个小洞，就ok了

另外转膜问题，我们实验室一直用低电流慢慢转过夜，这样损失少点，效果不错。

最后一个内参问题，我觉得和前面几个虫虫说的差不多，你可以尝试下
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11楼2012-05-16 15:19:53
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-05-20 18:33:47
有没有可能是抗体失效，稀释得太稀，或者蛋白的表达量不够？显影液使用太久效果也会变差
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12楼2012-05-19 23:05:09
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by flownaway at 2012-05-19 23:05:09:
有没有可能是抗体失效，稀释得太稀，或者蛋白的表达量不够？显影液使用太久效果也会变差

我的抗体是三月底刚买的。稀释是1:200的，推荐的稀释比例是1:200-1:1000，显影液的话我是用两次就换新的了。我的蛋白表达丰度没有具体报道，但是文献上上样20ug就可以做出来了，我上样好几百ug才只有很淡的条带，会不会是一抗的特异性很低啊？
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13楼2012-05-20 10:04:12
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-20 18:33:55
sunxiao1987: 金币+36, ★有帮助 2012-05-24 14:30:07
多克隆抗体的特异性确实会差一些，但只要是蛋白上样量足够的话应该还是会显出比较深的条带的。试试优化一下孵育抗体和清洗的时间吧
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14楼2012-05-20 10:16:57
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小刚不在

新虫 (初入文坛)
有可能是目的蛋白含量太低了。你上的蛋白应该是总蛋白的含量，所以你的上样量即便很高也只是代表总蛋白的量高，你的目的蛋白含量未必能达到上样量的要求，个人看法，不一定对
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15楼2013-03-09 20:40:22
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