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menglinyan

新虫 (小有名气)

[求助] 做了半个月的RAPD标记,为什么一条带都没有啊,速救!

在做麦冬的分子标记,是RAPD,按道理说,这个技术已经很成熟了,可是我就是死活跑不出来条带啊,做了半个月了,中间有次出来条带了,但是都很模糊,我设置的温度梯度是38-45之间,再低的都跑不出来,只有这个跑出来了一次。后来我用相同的DNA,引物,MIX,条件也相同,在做的时候又没有条带了。
我想问问大家:
1 引物会那么容易降解吗?每次在加样的时候才拿出来,就那么一会儿它会降解吗,如果真的降解了,那之前还跑出来一次,怎么解释。
2 温度梯度一般都多少呢,RAPD标记的温度大概都一样吧?应该在36度左右吧,可是我跑了很多次34-38度都没条带,唯一的那次有条带还是38-45度的。
我用的DNA都没有问题,因为师妹用相同的DNA做RAMP标记,效果都很好。我想知道还有哪些方面是我没有注意到的,导致实验失败的地方。
请大家帮帮吧,马上都毕业了,实验还没完,心里好着急,不能总是跑白板啊,我都快崩溃了,哎。
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

我也做RAPD,做了一周,只有一个引物出现条带,后来在做重复,条件相同,但就是没出现条带,这一周很郁闷
无所谓好或不好,人生一场虚空大梦,韶华白首,不过转瞬,惟有天道恒在,往复循环,不曾更改
3楼2012-04-14 18:26:35
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menglinyan

新虫 (小有名气)

怎么没人救我呀
2楼2012-04-14 11:09:36
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menglinyan

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-04-14 18:26:35:
我也做RAPD,做了一周,只有一个引物出现条带,后来在做重复,条件相同,但就是没出现条带,这一周很郁闷

你做的是什么材料,退火温度是多少,你侧过你的DNA浓度吗,会不会是浓度过高
4楼2012-04-15 14:12:04
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by menglinyan at 2012-04-15 14:12:04:
你做的是什么材料,退火温度是多少,你侧过你的DNA浓度吗,会不会是浓度过高

真菌的    36度,测浓度了  也稀释了
无所谓好或不好,人生一场虚空大梦,韶华白首,不过转瞬,惟有天道恒在,往复循环,不曾更改
5楼2012-04-15 18:02:06
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