| 查看: 1016 | 回复: 3 | |||
majunyang银虫 (初入文坛)
|
[交流]
蛋白活性电泳-质谱鉴定 已有2人参与
|
|
最近在做非变性活性电泳，遇到些问题不知怎么解决。我的实验步骤如下： 1.电泳：分离胶交联浓度12%，加SDS，与普通变性胶一样，浓缩胶不加SDS，上样缓冲液和电泳缓冲液均不加SDS。冰水混合物中电泳，电压100v. 2.洗去SDS：2.5%Triton X-100 振荡1h.之后pH7.2磷酸盐缓冲液洗3次。 3.反应：50度下 泡在酪蛋白溶液中反应30min. 4.考染脱色 如图： 两种样品，空白区域太大，可能是酶活高，未稀释。 另外，我想拿胶去做质谱鉴定，不知可不可以。酶将酶本身及周围区域的酪蛋白和周围的蛋白（？会不会分解周围原有的蛋白）都分解，显示白色，做个对照不加酪蛋白的对比下，看哪个条带继续存在就是酶的条带，不知对不对？然后去鉴定。 这两张图，貌似也看不出来。还有什么好的办法啊。我就想弄清同工酶的种类。   |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
-
招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 氧化/还原活性的蛋白质粘附在膜上，质谱中氧化/还原的质荷比
已经有5人回复
- 蛋白质活性电泳中目的蛋白的回收
已经有5人回复
- 蛋白质纯化与鉴定实验指南[l冷泉港]中译本
已经有661人回复
- AMPK蛋白纯化问题讨论
已经有21人回复
- 【求助/交流】关于蛋白质质谱鉴定的疑问
已经有5人回复
- 【推荐】973 三维培养干细胞自我更新与定向分化的调控网络
已经有9人回复
- 【求助】复旦考研药分
已经有4人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MicEPI: 114
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19796.7
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.7小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2012-04-15 18:58:57
majunyang
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 739.6
- 帖子: 25
- 在线: 68.9小时
- 虫号: 1240657
- 注册: 2011-03-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-04-17 10:42:21
4楼2014-04-28 13:01:06
25
