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majunyang

银虫 (初入文坛)

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[交流] 蛋白活性电泳-质谱鉴定已有2人参与

最近在做非变性活性电泳，遇到些问题不知怎么解决。我的实验步骤如下：
1.电泳：分离胶交联浓度12%，加SDS，与普通变性胶一样，浓缩胶不加SDS，上样缓冲液和电泳缓冲液均不加SDS。冰水混合物中电泳，电压100v.
2.洗去SDS：2.5%Triton X-100 振荡1h.之后pH7.2磷酸盐缓冲液洗3次。
3.反应：50度下泡在酪蛋白溶液中反应30min.
4.考染脱色
如图：
两种样品，空白区域太大，可能是酶活高，未稀释。
另外，我想拿胶去做质谱鉴定，不知可不可以。酶将酶本身及周围区域的酪蛋白和周围的蛋白（？会不会分解周围原有的蛋白）都分解，显示白色，做个对照不加酪蛋白的对比下，看哪个条带继续存在就是酶的条带，不知对不对？然后去鉴定。
这两张图，貌似也看不出来。还有什么好的办法啊。我就想弄清同工酶的种类。

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