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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 斑马鱼胚胎整体原位杂交问题求助！
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so_what

无虫 (初入文坛)

[求助] 斑马鱼胚胎整体原位杂交问题求助！

我做的是RNA原位杂交的，用的24hpf的鱼，做了2次，最后显色的时候发现胚胎都碎了，求助各位高人这是由哪些原因引起的，有点纠结啊，谢谢大家指点啊。
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1楼 2012-04-12 16:59:25
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curie

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-12 19:48:21
你是用什么方法做的RNA原位杂交？这对RNA量要求很高吧。 现在Affymetrix的ViewRNA很方便做原位，对RNA的量要求也很低，但价格稍贵……
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2楼2012-04-12 17:28:50
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so_what

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by curie at 2012-04-12 17:28:50:
你是用什么方法做的RNA原位杂交？这对RNA量要求很高吧。 现在Affymetrix的ViewRNA很方便做原位，对RNA的量要求也很低，但价格稍贵……

RNA要求现在不是问题，但发现现在胚胎都碎了，尴尬了
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3楼2012-04-12 18:06:01
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GOLAN

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白酶消化时间短一点，浓度放低点试试
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4楼2012-04-15 18:28:52
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so_what

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by GOLAN at 2012-04-15 18:28:52:
蛋白酶消化时间短一点，浓度放低点试试

嗯 我试试 谢谢
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5楼2012-04-16 09:53:34
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so_what

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by GOLAN at 2012-04-15 18:28:52:
蛋白酶消化时间短一点，浓度放低点试试

补充下，我用的蛋白酶浓度是10ug/ml，处理了3分钟 不知道有没有问题
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6楼2012-04-16 10:34:13
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cjn310

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by GOLAN at 2012-04-15 18:28:52
蛋白酶消化时间短一点，浓度放低点试试

1我想检测斑马鱼的??(原位杂交到底是干什么用的,是用来检测斑马鱼有没有什么基因吗,这里能具体说说吗,那检测出来的话具体应用是什么,应用到其他生物上说明什么呢)，用原位杂交的方法，那我必须得先构建探针是吧 2我看好多探针都是通用的，这是什么原理啊，不是每种基因对应的序列不一样吗，那怎么会有什么公共探针和探针库的概念呢(我 3要检测的序列是已知的还是未知的呢,如果是未知的那探针怎么个合成法(没有序列怎么合成探针)
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7楼2012-10-06 15:21:29
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GOLAN

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cjn310 at 2012-10-06 15:21:29
1我想检测斑马鱼的??(原位杂交到底是干什么用的,是用来检测斑马鱼有没有什么基因吗,这里能具体说说吗,那检测出来的话具体应用是什么,应用到其他生物上说明什么呢)，用原位杂交的方法，那我必须得先构建探针是吧 2我 ...

原位杂交主要是检测某个基因在体内的表达情况，当然先知道有这个基因存在。至于通用探针，我想是由于基因的保守性决定的吧。要检测哪个基因才去合成哪个基因的探针，合成的方法什么的书上和网上都有。
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8楼2012-10-06 18:06:05
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