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happywyh

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR

PCR产物跑电泳,没有目的条带,有类似是引物二聚体的条带,什么原因造成的??
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 跑内参是很有必要的,鼓励应助,常来哦 2012-04-11 08:27:13
第一,你是否确定你的cDNA没有问题,可以跑个内参看看 ;第二,如果模板没问题,你的目的条带含量是否很低?引物特异性是否很好?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我就是我
4楼2012-04-11 00:11:32
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查看全部 12 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很有可能是引物没设计好,建议重新设计引物,然后摸索条件
2楼2012-04-10 22:11:10
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 太正确了,PCR不成功的因素是多方面的 2012-04-11 08:26:11
可能的原因太多了
1:引物量过多,退火温度较低,造成引物形成二聚体不能与模板结合;
2:退火温度太高,引物不能与模板集合;
3:PCR仪插孔老化,建议换些插孔试试;
4:Taq酶失活、体系不好、模板不对等等;
5:然后就是引物不好
    如果确定这些都不是原因,可再次重复……
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
3楼2012-04-11 00:02:36
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happywyh

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by imyting at 2012-04-11 00:02:36:
可能的原因太多了
1:引物量过多,退火温度较低,造成引物形成二聚体不能与模板结合;
2:退火温度太高,引物不能与模板集合;
3:PCR仪插孔老化,建议换些插孔试试;
4:Taq酶失活、体系不好、模板不对等等; ...

之前有一次用菌落PCR,疑似有目的条带和二聚体形成,之后再做就没有目的带
其他条件是不变的
5楼2012-04-11 10:39:34
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