应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR
121/2返回列表12下一页
查看: 1684  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

happywyh

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR

PCR产物跑电泳，没有目的条带，有类似是引物二聚体的条带，什么原因造成的？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-04-10 21:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是引物没设计好，建议重新设计引物，然后摸索条件
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-10 22:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 太正确了，PCR不成功的因素是多方面的 2012-04-11 08:26:11
可能的原因太多了
1：引物量过多，退火温度较低，造成引物形成二聚体不能与模板结合；
2：退火温度太高，引物不能与模板集合；
3：PCR仪插孔老化，建议换些插孔试试；
4：Taq酶失活、体系不好、模板不对等等；
5：然后就是引物不好
    如果确定这些都不是原因，可再次重复……
赞一下 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
3楼2012-04-11 00:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 跑内参是很有必要的，鼓励应助，常来哦 2012-04-11 08:27:13
第一，你是否确定你的cDNA没有问题，可以跑个内参看看 ；第二，如果模板没问题，你的目的条带含量是否很低？引物特异性是否很好？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
我就是我
4楼2012-04-11 00:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by imyting at 2012-04-11 00:02:36:
可能的原因太多了
1：引物量过多，退火温度较低，造成引物形成二聚体不能与模板结合；
2：退火温度太高，引物不能与模板集合；
3：PCR仪插孔老化，建议换些插孔试试；
4：Taq酶失活、体系不好、模板不对等等； ...

之前有一次用菌落PCR，疑似有目的条带和二聚体形成，之后再做就没有目的带
其他条件是不变的
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-11 10:39:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以把退火温度提高一下看看，或者做个梯度吧……
赞一下 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
6楼2012-04-11 12:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2个办法，
1， 根绝三楼的建议，控制一个量变，其他不变，找出原因。
2， 从头到尾重新做，所有PCR用到的TAQ, BUFFER, 模板，引物等一律全换新的
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-11 12:34:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原因无比之多。。。
引物
退火温度
延伸时间
酶
等等。。。。
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2012-04-11 19:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说了很多，最重要的就是引物，如果你确定你的引物没什么大问题的话，很有可能就是基因本身表达的问题，因为你说你菌落PCR看到结果了，这个结果是以基因组为模版得到的，所以你可以通过一些方法来提高你基因的表达量，而后你再试一下，好运啊、、、
赞一下 回复此楼
我努力我奋斗我成功
9楼2012-04-11 20:39:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风逝zhilv

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正如楼上各位所说，原因很多，不要盲目重复试验，好好回顾比较一下，找找两次实验的差异，细到每个步骤，尤其是引物的稀释！祝好运！
赞一下 回复此楼
为梦想而努力，不做生活的奴隶！
10楼2012-04-12 00:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 happywyh 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:31 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 7/350 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 18:46 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭