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shuodanjiang金虫 (初入文坛)
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[求助]
人体肾脏293细胞
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请问哪位大侠正在做人体肾脏293细胞的？本人正准备实验有一些不明之处，还望高人多多指点！ 1、要用什么样的培养基 2、培养时有没有什么需要特殊注意的。多谢！ |
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shuodanjiang
金虫 (初入文坛)
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3楼2012-04-10 10:35:25
wtyyyyy1988
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 很热心，欢迎常来 2012-04-10 09:29:22
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一：用DMEM培养基，百分之十的血清 二：它是贴壁细胞，注意消化过程，消化过度对后期生长贴壁和形态影响比较大，长了百分之八九十就要传代咯 具体的可以看看ATCC上面写的，祝实验顺利！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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2楼2012-04-10 00:26:06
wtyyyyy1988
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Protocol: Remove and discard culture medium. Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor. Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes). Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal. Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting. Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.An inoculum of 2 X 10 (3) to 6 X 10 (3) viable cells/cm2 is recommended. Incubate cultures at 37°C.6. Subculture when cell concentration is between 6 and 7 X 10(4) cells/cm2. Subcultivation Ratio: 1:6 to 1:10 weekly Medium Renewal: Every 2 to 3 days |
4楼2012-04-10 10:59:28
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