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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的引物扩增后会被降解掉吗？
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weandyouzhy

木虫 (小有名气)

[求助] PCR的引物扩增后会被降解掉吗？

一般的DNA复制完成时，RNA引物会被降解掉。那么在pcr扩增反应中。Taq酶会不会将引物链剪切掉呢？另外，能不能详细的介绍下PCR中所加试剂的量的原因。谢谢了
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everything*will*be*OK！so*never*give*up,man!
1楼 2012-04-07 10:52:24
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chibang1220

木虫 (著名写手)
肯定不会啊，多看看PCR原理吧
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人的差别在于业余时间
11楼2012-04-15 21:26:53
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
这个问题比较麻烦~lz可以找相关的书籍和文献参考一下
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-04-07 14:40:48
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:00
应该是不会的，因为在你跑胶的时候会发现在最顶端还是有引物条带存在的，而且Taq酶均具有5'-3'聚合酶活性，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除错配，切平末端；5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。
PCR试剂中的量：
1.首先要看你的体系是多少ul，规划好引物、模板、dNTP、酶和Buffer的量，其余用水补齐。
2.引物一般是要过量的，这样才能保证PCR能够在设定的循环里面跑完，一般浓度是uM。
3.模板一般就是ng级别的就可以了，主要是能保证前期引物可以与其结合。
4.dNTP的话一般都是mM级别的，它的浓度要比较大，保证反应顺利进行。
5.酶的话说明书上一般都会提到，按它的活性和单位来加就可以了。
6.Buffer要根据你的总体积，将储备浓度换算成最终的1X的就可以了。
祝好运！
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3楼2012-04-07 14:56:00
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:09
weandyouzhy: 回帖置顶 2012-04-07 20:23:00
答案是否定的，Taq酶不具有水解引物的能力，不然的话PCR还如何继续，或者是你如何控制Taq酶发挥作用？PCR条件中有考虑这方面的吗？此外，在拿PCR产物跑胶时，有时能看到明显的引物二聚体条带，这也说明引物不会被降解。PCR体系中各组分的量基本是围绕酶和模板确定的，Buffer是10×的，当然加总体积的十分之一了，Mg离子的浓度关系到Taq酶的活力也是确定的，引物的浓度只要达到一定程度就好了，过多会产生二聚体之类的，过少影响PCR反应启动，模板也是的，多了也不好纯化啊，酶的话一般都有推荐量的，一定的体积加上那么多的酶就能满足要求了。而且酶的说明书也没有明确说其活力如何，只是给出在一定条件下的PCR结果罢了，只是参考。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2012-04-07 15:04:58
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