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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » CAT吸光度值上升
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baiyongxia

新虫 (初入文坛)

[求助] CAT吸光度值上升

按理论CAT吸光度值应该会下降，但我的CAt值不稳定，而且有的会不断上升，是哪出问题了，请大侠赐教！
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1楼 2012-03-30 22:19:17
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gymylove

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jhu132llh: 金币+1, 鼓励积极交流 2012-04-01 20:25:52
H2O2不能库存太久   最好看生产日期再买   新鲜的好些
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3楼2012-03-31 09:53:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jhu132llh: 金币+3, 感谢积极应助 2012-04-01 20:25:39
首先确认一下，楼主是用紫外吸收法检测H2O2分解造成的A240 nm变化吧？

我的方法如下
取0.1 ml待测酶液，加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml，40 mmol/l H2O2 1.5 ml，立即计时，测定波长240 nm处吸光度值，每隔30 s读数一次，共测定4 min。以不含酶待测液作为空白对照。CAT活力以ΔA240/Δt=0.001/min为一个酶活力单位（U），比活力为U/mg蛋白。

在我实验过程中也曾碰到240 nm吸光度不降反升，解决这个问题有这么几个因素要考虑
1 保证所使用的试剂都没有问题，H2O2一定要现用现配
2 有时候提取的样品中CAT含量似乎有差别，最好选择一个合适的样品量，在我的试验中有时候0.1 ml待测酶液做不出结果，换成0.2 ml就有很大改观。
3 观察观察只加待测酶液或只加H2O2的对照组吸光度变化情况，有时候由于样品或试剂污染，存在一些可能在240 nm有吸收的物质，会严重干扰测定
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baiyongxia
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-03-30 22:41:46
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baiyongxia

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-30 22:41:46:
首先确认一下，楼主是用紫外吸收法检测H2O2分解造成的A240 nm变化吧？

我的方法如下
取0.1 ml待测酶液，加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml，40 mmol/l H2O2 1.5 ml，立即计时，测定波长240 nm处吸光度 ...

十分感谢，我先试试哈
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4楼2012-04-01 09:41:37
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的
过氧化氢的保质期通常都是很短的
我记得好像最长的也不超过半年
一般都是三个月左右
所以一定要注意保质期
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2012-04-01 20:26:41
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