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baiyongxia

新虫 (初入文坛)

[求助] CAT吸光度值上升

按理论CAT吸光度值应该会下降,但我的CAt值不稳定,而且有的会不断上升,是哪出问题了,请大侠赐教!
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baiyongxia

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-30 22:41:46:
首先确认一下,楼主是用紫外吸收法检测H2O2分解造成的A240 nm变化吧?

我的方法如下
取0.1 ml待测酶液,加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml,40 mmol/l H2O2 1.5 ml,立即计时,测定波长240 nm处吸光度 ...

十分感谢,我先试试哈
4楼2012-04-01 09:41:37
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查看全部 6 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jhu132llh: 金币+3, 感谢积极应助 2012-04-01 20:25:39
首先确认一下,楼主是用紫外吸收法检测H2O2分解造成的A240 nm变化吧?

我的方法如下
取0.1 ml待测酶液,加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml,40 mmol/l H2O2 1.5 ml,立即计时,测定波长240 nm处吸光度值,每隔30 s读数一次,共测定4 min。以不含酶待测液作为空白对照。CAT活力以ΔA240/Δt=0.001/min为一个酶活力单位(U),比活力为U/mg蛋白。

在我实验过程中也曾碰到240 nm吸光度不降反升,解决这个问题有这么几个因素要考虑
1 保证所使用的试剂都没有问题,H2O2一定要现用现配
2 有时候提取的样品中CAT含量似乎有差别,最好选择一个合适的样品量,在我的试验中有时候0.1 ml待测酶液做不出结果,换成0.2 ml就有很大改观。
3 观察观察只加待测酶液或只加H2O2的对照组吸光度变化情况,有时候由于样品或试剂污染,存在一些可能在240 nm有吸收的物质,会严重干扰测定

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-03-30 22:41:46
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gymylove

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
jhu132llh: 金币+1, 鼓励积极交流 2012-04-01 20:25:52
H2O2不能库存太久   最好看生产日期再买   新鲜的好些
3楼2012-03-31 09:53:54
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是的
过氧化氢的保质期通常都是很短的
我记得好像最长的也不超过半年
一般都是三个月左右
所以一定要注意保质期
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2012-04-01 20:26:41
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