| 查看: 2797 | 回复: 8 | ||||
[交流]
分成分，过硅胶柱，求指导！
|
|
取乙酸乙酯部位60g进行硅胶柱层析，层析柱（8cm×110cm），20倍量硅胶（200-400目）。洗脱剂为不同比例的二氯甲烷-丙酮。二氯甲烷-丙酮（100:1）部分经重结晶得化合物Ⅰ（8.4mg）；二氯甲烷-丙酮（50:1）部分得化合物Ⅱ粗品（131.9mg），经再次硅胶柱层析，流动相用石油醚-丙酮（3:1）得纯化合物Ⅱ（26mg）；二氯甲烷-丙酮（20:1）部分得化合物Ⅲ粗品（18mg），经再次硅胶柱层析，流动相用石油醚-丙酮（4:1）得纯化合物Ⅲ（1.6mg）；二氯甲烷-丙酮（15：1）部分经重结晶得化合物Ⅳ纯品（52mg），化合物Ⅴ纯品（11.5mg）；二氯甲烷-丙酮（5:1）部分经重结晶得化合物Ⅵ（38.8mg）；二氯甲烷-丙酮（3:1）部分经再次硅胶柱层析，流动相用三氯甲烷-甲醇（15:1）得化合Ⅶ纯品（25.7mg），该部分洗脱物经重结晶后得化合物Ⅷ纯品（8.6mg）。 （流程图已附） 我想按照上述过程来过硅胶柱，主要要得到化合物Ⅳ纯品，化合Ⅶ纯品，第一次做，有一些问题不了解，求指教！ （1）上述的过程是梯度洗脱得到的，我只想得到化合物Ⅳ纯品和化合Ⅶ纯品， 请问我可以直接用 二氯甲烷-丙酮（15：1）洗脱后再用二氯甲烷-丙酮（3:1）洗脱嘛？这样会不会不纯，还是要先点板子看看？如果跑板子是一个点，就能说明是一个物质吗？ （2）二氯甲烷-丙酮（15：1）部分经重结晶得化合物Ⅳ纯品（52mg），化合物Ⅴ纯品（11.5mg）为什么这个比例跑出来是两个物质，这是怎么样一个情况？怎么分开这两个物质？ （3)上述过程中的重结晶是怎么操作的？ （4）湿法装柱，该用什么溶剂拌硅胶呢？为什么我以硅胶和溶剂1:1的比例拌硅胶，感觉硅胶还是干的，无法装入柱子里呢。上次我们用二氯甲烷装柱，拌不湿，多加了之后硅胶成半透明状流体，可装入柱中，但是觉得太稀了没法上样，把它放置了一段时间后，柱子变成一小段是硅胶一小段是溶剂，这样相互间隔着。 （5）过这样一个硅胶柱，要多长时间呢，怎么来区分一个成分是否出完全了？很多化合物为无色，应该看不到色带吧？还是一个比例只能洗脱一个成分，用薄层检测那里面还有没有那个成分了嘛？ （6）如果硅胶柱洗脱需要几天，那晚上一般要怎么办啊？继续洗脱，怎么加洗脱剂，怎么接洗脱下来的东西呢？ 请大家不吝赐教哈！帮帮初学者！  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 我的实验与情感 |
» 猜你喜欢
国自然面上D口祈祷
已经有3人回复
-
内心匮乏
已经有12人回复
-
没收到消息，再次陪跑
已经有3人回复
-
E口会评
已经有10人回复
-
跨出版社商投稿
已经有3人回复
-
不要再数国自然申请书的 filecode 的分隔符个数了
已经有20人回复
-
明天E口面上会评
已经有9人回复
-
MSER送审了还被拒稿
已经有6人回复
-
祈祷青基必中
已经有16人回复
-
27届辽宁大学应届毕业生申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 过硅胶柱时压力和溶剂流速哪个对物质分离度影响大一些？
已经有3人回复
- 过硅胶柱时流动相出错了
已经有17人回复
- 乙酸乙酯部分上硅胶柱该选用什么洗脱剂？
已经有13人回复
- 聚合物过硅胶柱
已经有13人回复
- 盐类物质硅胶柱能分开吗
已经有5人回复
- 什么物质容易在硅胶柱上分解
已经有5人回复
- 【求助】ODS反相硅胶柱分离苯乙醇苷类物质怎么分啊？
已经有10人回复
- 【求助】HF板上行展开3.5cm，Rf=0.29和0.34斑点圆外切的两组分能一次硅胶柱层析分离吗
已经有7人回复
- 【求助】利用干法上样时，与待分离的样品混合所用的硅胶是过柱硅胶还是铺板用的硅胶？
已经有13人回复
- 【讨论】硅胶柱的径高比
已经有8人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
祈福面上
+5/465
-
【哈工大-材料学院-新材料及成形技术-招收博士、硕士研究生】长期有效
+2/152
-
中南大学材料科学与工程学院招收2027年博士研究生（1-2名）
+1/128
-
BBC儿童英语科普《Do you know》高清英字，培养思考习惯，非常好的启蒙科普片！
+1/89
-
【重磅招聘】小巨人企业西顿高薪招聘水性树脂研发博士、硕士（广州）
+1/61
-
祈福，求顺利！
+1/51
-
中国科学院赣江创新研究院李庭刚研究员团队招收与江西理工大学联合培养博士生
+1/27
-
2027君科院博士研究生招生欢迎报考
+2/26
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/12
-
7月15日-21日暨南大学2027年研究生招生线上宣讲会直播重磅开启！
+1/11
-
干细胞毒理学研究组招收2027年硕博
+1/9
-
暨南大学开明峰教授团队博士后招聘启事
+1/3
-
南科大医学院神经胶质细胞课题组招收2027年入学博士生和博士后
+1/3
-
nature子刊投稿状态求助：Editor Decision Started
+1/3
-
最近投稿的文章多吗？
+1/3
-
南方科技大学医学院-神经胶质细胞课题组招收联培（客座）博士生
+1/2
-
大家预测下今年国家社科基金和教育部人文社科项目啥时候能公布结果？
+1/2
-
上海交通大学高杨课题组招聘研究助理
+1/2
-
直播预告 | 7月15日，暨南大学2027年研究生招生线上宣讲会精彩继续！
+1/2
-
文献里的标杆，不一定接你的活儿——HUVEC转染的真实排坑复盘
+1/1
我也不懂 求指教 
2楼2012-03-27 22:32:42
3楼2012-03-27 22:45:18
★ ★ ★
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
xiaoxiao270: 金币+2, 3Q 2012-03-28 19:57:16
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
xiaoxiao270: 金币+2, 3Q 2012-03-28 19:57:16
|
1.洗脱剂直接这样跳，后面处理很难的，最好能慢点过渡。跑板子用两种以上溶剂系统展开都是一个点的话，差不多是一个东西，纯度还是要用HPLC检测的。 2.这是很有可能的，两个化合物洗脱下来的时间不一样，后面结晶的溶剂系统也可能不一样，要根据文献和预实验自己摸索，找出最佳的。 3.重结晶看书吧，很详细的。呵呵呵 4.用多点溶剂是没问题的，多了就从下面放掉嘛！损失点溶剂而已。后面一段硅胶一段溶剂就对啦！但硅胶层不能断层或有裂纹哦，否则影响分离效果的。 5.小柱子一般一天左右冲完吧，大柱子一般一个星期左右。最好有液相跟踪监测，跑板子最好浓缩一下，要不太稀不好看到结果。一个比例能冲出很多成分的，有的一个比例能把你要的全冲下来，做多了就知道了。做与实验也好。 6.硅胶柱最好快点冲，因为硅胶有死吸附作用，时间久了样品损失大，晚上能轮班的话最好，不行就自己调流速，慢点滴，不要停，柱子上可以加个加液球，晚上多加点洗脱剂，晚上过夜要好好计算滴速和柱子上的洗脱剂。 一开始是比较懵的，做做就好了。加油 |
4楼2012-03-28 11:26:50
5楼2012-03-28 18:11:02
顶到首页 6楼2012-04-04 15:45:12
daisy212475
新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-04-05 08:24:19
豆哥: 金币-49, 屏蔽内容, 违规存档, 广告 2012-05-17 08:16:06
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-04-05 08:24:19
豆哥: 金币-49, 屏蔽内容, 违规存档, 广告 2012-05-17 08:16:06
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2012-04-04 21:00:27
★ ★
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-04-05 08:24:26
云飞暖落(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-04-05 08:24:26
|
本帖内容被屏蔽 |
8楼2012-04-05 02:37:56
9楼2015-07-20 19:06:10